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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 各位大神，小伙伴们有做蛋白酶表达的看过来
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小毛虫222

新虫 (初入文坛)

[交流] 各位大神，小伙伴们有做蛋白酶表达的看过来 已有2人参与

本人做的蛋白酶表达，系以pet28a为载体，BL21(DE3)为宿主的蛋白酶胞内表达，当加入IPTG诱导4h后发现培养基中有黄色絮状物，在这里本人认为出现了致死，而且对照组(BL21-pet28a)却长势非常好，细胞均匀。重点是在提取总蛋白后，在进行SDS_PAGE蛋白电泳分析时发现实验组的很多蛋白都已经降解，条带少，无法做出一个漂亮的图来显示我的蛋白酶表达，希望有过蛋白酶表达经验的小伙伴，大神们帮我指点一二！

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1楼 2017-08-03 11:25:05
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小毛虫222

新虫 (初入文坛)
该菌是我师兄筛选出来，由我做克隆表达，师兄的文献中显示该酶被EDTA完全抑制，而且我在提取总蛋白过程中，已经加了EDTA为什么还是会降解？求大神支招！

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2楼2017-08-03 11:28:04
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小毛虫222

新虫 (初入文坛)
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3楼2017-08-04 08:27:20
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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4楼2017-08-05 16:42:23
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何军爱学习

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也一直做taq酶蛋白  用的是LB培养基  IPTG诱导  但是未出现蛋白降解  你的我怀疑筛选是否正确

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5楼2017-08-05 20:43:16
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小毛虫222

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 何军爱学习 at 2017-08-05 20:43:16
我也一直做taq酶蛋白  用的是LB培养基  IPTG诱导  但是未出现蛋白降解  你的我怀疑筛选是否正确

我做的是一个丝氨酸蛋白酶表达，这个蛋白酶的底物很广的，有很多蛋白质都会被其降解

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6楼2017-08-07 07:34:34
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小毛虫222

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by -字仲康 at 2017-08-05 16:42:23
大肠表达的酶有活性？是否EDTA的添加量不够

应该是有活性的，我在添加多一点试试

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7楼2017-08-07 07:36:37
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