24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 768  |  回复: 6

小毛虫222

新虫 (初入文坛)

[交流] 各位大神,小伙伴们有做蛋白酶表达的看过来 已有2人参与

本人做的蛋白酶表达,系以pet28a为载体,BL21(DE3)为宿主的蛋白酶胞内表达,当加入IPTG诱导4h后发现培养基中有黄色絮状物,在这里本人认为出现了致死,而且对照组(BL21-pet28a)却长势非常好,细胞均匀。重点是在提取总蛋白后,在进行SDS_PAGE蛋白电泳分析时发现实验组的很多蛋白都已经降解,条带少,无法做出一个漂亮的图来显示我的蛋白酶表达,希望有过蛋白酶表达经验的小伙伴,大神们帮我指点一二!

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小毛虫222

新虫 (初入文坛)

该菌是我师兄筛选出来,由我做克隆表达,师兄的文献中显示该酶被EDTA完全抑制,而且我在提取总蛋白过程中,已经加了EDTA为什么还是会降解?求大神支招!

发自小木虫Android客户端
2楼2017-08-03 11:28:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小毛虫222

新虫 (初入文坛)

3楼2017-08-04 08:27:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

-字仲康

禁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

4楼2017-08-05 16:42:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

何军爱学习

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也一直做taq酶蛋白  用的是LB培养基  IPTG诱导  但是未出现蛋白降解  你的我怀疑筛选是否正确

发自小木虫Android客户端
5楼2017-08-05 20:43:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小毛虫222

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 何军爱学习 at 2017-08-05 20:43:16
我也一直做taq酶蛋白  用的是LB培养基  IPTG诱导  但是未出现蛋白降解  你的我怀疑筛选是否正确

我做的是一个丝氨酸蛋白酶表达,这个蛋白酶的底物很广的,有很多蛋白质都会被其降解

发自小木虫Android客户端
6楼2017-08-07 07:34:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小毛虫222

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by -字仲康 at 2017-08-05 16:42:23
大肠表达的酶有活性?是否EDTA的添加量不够

应该是有活性的,我在添加多一点试试

发自小木虫Android客户端
7楼2017-08-07 07:36:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小毛虫222 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] 如何实现卤原子转化 +3 BT20230424 2026-05-15 7/350 2026-05-19 19:23 by bencaidai
[基金申请] 2026山东省优青 +3 luckinging 2026-05-14 4/200 2026-05-19 16:15 by 52wls
[基金申请] 评审有感 +10 popular289 2026-05-18 16/800 2026-05-19 14:46 by popular289
[有机交流] 反应很差,大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 3/150 2026-05-19 13:56 by xtlilibin
[考博] 找博士生导师 +6 小代想上岸 2026-05-15 7/350 2026-05-19 10:22 by free_fisher
[考博] 26/27申博自荐-锂/钠电池方向 5+3 狗头军师. 2026-05-15 4/200 2026-05-19 09:10 by moonboat
[基金申请] 同样的基金本子,换个专家直接从C变A! +3 国自然国社科中 2026-05-19 3/150 2026-05-19 08:50 by Equinoxhua
[基金申请] 别被青基扩招骗了!26年科研内卷才刚刚开始 +3 国自然国社科中 2026-05-14 4/200 2026-05-19 08:48 by archvillain
[考博] 2026博士还有哪些学校有名额 +7 小王求读研 2026-05-15 8/400 2026-05-19 08:27 by zhyzzh
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
[基金申请] 面上本子正文33页,违规吗?会被低分嘛? +8 1234567wang 2026-05-17 10/500 2026-05-18 18:52 by zzahkj
[基金申请] 国自然上会要求 +5 无名者登山 2026-05-18 9/450 2026-05-18 17:50 by BlakeReary
[硕博家园] 考博自荐 +5 科研狗111 2026-05-13 6/300 2026-05-18 11:22 by 糊糊涂涂好
[基金申请] 青C资助名额大幅增加! +12 西葫芦炒鸡蛋 2026-05-13 16/800 2026-05-18 10:02 by Equinoxhua
[基金申请] 重磅!青年科学基金项目(C类)资助增幅预计超过50% +7 水和泥不是水泥 2026-05-13 10/500 2026-05-18 07:50 by 水和泥不是水泥
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
[考博] 光量子物理方向 博士招生 1人(2026.09) +3 sandyworld 2026-05-15 4/200 2026-05-17 14:38 by sandyworld
[硕博家园] 申请博士 +3 呃?呃 2026-05-15 3/150 2026-05-16 11:01 by a4742549
[文学芳草园] 风把牡丹吹跑了 +5 myrtle 2026-05-12 9/450 2026-05-15 15:27 by myrtle
[教师之家] 教学课件你会给同学吗 +8 硕士研究生吗 2026-05-13 8/400 2026-05-14 22:23 by 常规沥青
信息提示
请填处理意见