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jghgimi4

金虫 (小有名气)

[交流] SDS-PAGE问题 条带模糊

这是我跑出来的胶,marker跑歪了不说,怎么只出来了两三条,并且还很模糊。我配的是5%的浓缩胶,10%的分离胶,按理说还应该再跑出两条。
倒数第二条带是烟草全蛋白的,怎么也只有那么几条,还很弱,跑电泳的操作我感觉已经可以了,不知道为什么还会出现这种问题?
别的试剂大部分都是新买的,就剩下acr、bis,这两个会不会过期?
其他条带也是从植物中提的全蛋白,我试过几种方法,效果都不太好,现在我不知道怎么办了,哪位高手能指点一下,小弟不胜感激!
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shwang007

木虫 (正式写手)

染色前最好髟醋酸固定过夜,另外就是将分离胶浓度加大到12.5%,效果可能会更好
7楼2009-02-09 09:12:36
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coffee424907

木虫 (著名写手)

瞎说几句


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来生物版~ 2-4 21:28
1、有人建议两边的泳道不上样,这两个道容易出问题

2、丙烯酰胺溶液说是最好1月配1次,还有配完过滤了吗?

3、上样量够大不?

4、染色、脱色阶段有没有问题?
2楼2009-02-04 17:21:05
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来生物版~ 2-4 21:28
1如果试剂没问题,一定要保证下层胶完全凝固,凝固之后上面滴一些异丙醇,压力作用下使下层胶面平整.
2上层胶插梳子的时候,一定要保证梳子下面没气泡,而且梳子下面也水平,再有就是拔梳子的时候,凹槽里边容易有好多残余胶,小心的扣出来。
3胶板放入缓冲液的时候注意下面是否有气泡,否则会影响条带整齐。
4上样的时候,不要扎破凹槽,两边的条带容易变形正常,压力一般向中间堆积,尤其是上样量少的时候。
会当凌绝顶,一览众山小
3楼2009-02-04 18:18:27
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有缘千里

银虫 (小有名气)

你提纯的样品里面是不是带着什么提取剂之类的东西。一般样品脱盐脱不干净就这个样子。
4楼2009-02-04 20:23:34
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