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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE问题 条带模糊
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jghgimi4

金虫 (小有名气)

[交流] SDS-PAGE问题 条带模糊

这是我跑出来的胶，marker跑歪了不说，怎么只出来了两三条，并且还很模糊。我配的是5%的浓缩胶，10%的分离胶，按理说还应该再跑出两条。
倒数第二条带是烟草全蛋白的，怎么也只有那么几条，还很弱，跑电泳的操作我感觉已经可以了，不知道为什么还会出现这种问题？
别的试剂大部分都是新买的，就剩下acr、bis，这两个会不会过期？
其他条带也是从植物中提的全蛋白，我试过几种方法，效果都不太好，现在我不知道怎么办了，哪位高手能指点一下，小弟不胜感激！
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1楼 2009-02-04 16:55:49
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coffee424907

木虫 (著名写手)

瞎说几句

★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来生物版~ 2-4 21:28
1、有人建议两边的泳道不上样，这两个道容易出问题

2、丙烯酰胺溶液说是最好1月配1次，还有配完过滤了吗？

3、上样量够大不？

4、染色、脱色阶段有没有问题？
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2楼2009-02-04 17:21:05
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来生物版~ 2-4 21:28
1如果试剂没问题，一定要保证下层胶完全凝固，凝固之后上面滴一些异丙醇，压力作用下使下层胶面平整.
2上层胶插梳子的时候，一定要保证梳子下面没气泡，而且梳子下面也水平，再有就是拔梳子的时候，凹槽里边容易有好多残余胶，小心的扣出来。
3胶板放入缓冲液的时候注意下面是否有气泡，否则会影响条带整齐。
4上样的时候，不要扎破凹槽，两边的条带容易变形正常，压力一般向中间堆积，尤其是上样量少的时候。
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会当凌绝顶，一览众山小
3楼2009-02-04 18:18:27
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有缘千里

银虫 (小有名气)
你提纯的样品里面是不是带着什么提取剂之类的东西。一般样品脱盐脱不干净就这个样子。
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4楼2009-02-04 20:23:34
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hu6704526

银虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论，欢迎常来~ 2-8 15:55
一般情况下注意两个问题：
  一：样品的制备，SDS-PAGE胶是变性条件下电泳，样品沉淀后直接用上样缓冲液溶解后上样就可以了。
  二：凝胶配制后要有充分的凝固时间，我认为要大于两个小时才可以，尤其是分离胶。
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5楼2009-02-08 15:13:31
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shadowfly

木虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 2-9 16:14
1、acr/bis重新配，其他的最好也重新配，特别是aps
2、降低电压、电流
3、样品脱盐
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6楼2009-02-09 01:12:22
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shwang007

木虫 (正式写手)
染色前最好髟醋酸固定过夜，另外就是将分离胶浓度加大到12.5%，效果可能会更好
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7楼2009-02-09 09:12:36
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