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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 纯化的PCR产物测序无信号、双峰或者特殊结构
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 纯化的PCR产物测序无信号、双峰或者特殊结构

扩增一个片段（电泳检测是单一条带），胶回收纯化后送公司测序（回收后电泳检测条带较亮）。测序结果经常是PCR无信号，双峰或者特殊结构。提供的样品浓度够了啊，纯度的话，扩增出的单一条带胶回收试剂盒回收，应该不会有问题的。哪位大虾给个建议，怎么改善条件才能使得测序结果较好呢？


我这边能保证的就是PCR扩增时单一条带，回收产物条带较亮。但是回收产物是用胶回收试剂盒回收，纯度（A260/A280）没办法测。

有没有做测序的朋友，帮忙看看啊

[ Last edited by gaohuihui on 2017-7-21 at 14:51 ]
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1楼2017-07-21 13:23:45
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gufeng2008

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
纯化之后用ddH2O水洗脱下来，不要用试剂盒Elution buffer；浓度与size有关，size大的需要浓度更高些；测序公司测序反应没有做好，让重新测（片段结构复杂等）；最后一招就是克隆测序-就是做成质粒再测。
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108楼2017-07-24 14:12:58
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mlxmiao

木虫 (著名写手)
★
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
回收后的浓度太低，虽然亮

发自小木虫Android客户端
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3楼2017-07-21 13:41:50
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cffyau

至尊木虫 (文坛精英)
★
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
很好

发自小木虫Android客户端
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7楼2017-07-21 13:56:18
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mlxmiao at 2017-07-21 13:41:50
回收后的浓度太低，虽然亮

浓度多少才算不低呢？  另外，条带亮不就是浓度高么？
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11楼2017-07-21 14:21:49
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mjlsb6楼
2017-07-21 13:51   回复  
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫IOS客户端
wdxmu14楼
2017-07-21 14:34   回复  
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
一 发自小木虫IOS客户端
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