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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 纯化的PCR产物测序无信号、双峰或者特殊结构
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 纯化的PCR产物测序无信号、双峰或者特殊结构

扩增一个片段（电泳检测是单一条带），胶回收纯化后送公司测序（回收后电泳检测条带较亮）。测序结果经常是PCR无信号，双峰或者特殊结构。提供的样品浓度够了啊，纯度的话，扩增出的单一条带胶回收试剂盒回收，应该不会有问题的。哪位大虾给个建议，怎么改善条件才能使得测序结果较好呢？


我这边能保证的就是PCR扩增时单一条带，回收产物条带较亮。但是回收产物是用胶回收试剂盒回收，纯度（A260/A280）没办法测。

有没有做测序的朋友，帮忙看看啊

[ Last edited by gaohuihui on 2017-7-21 at 14:51 ]
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1楼 2017-07-21 13:23:45
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mlxmiao

木虫 (著名写手)
★
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
回收后的浓度太低，虽然亮

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3楼2017-07-21 13:41:50
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cffyau

至尊木虫 (文坛精英)
★
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很好

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7楼2017-07-21 13:56:18
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gaohuihui

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mlxmiao at 2017-07-21 13:41:50
回收后的浓度太低，虽然亮

浓度多少才算不低呢？  另外，条带亮不就是浓度高么？
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11楼2017-07-21 14:21:49
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mlxmiao

木虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by gaohuihui at 2017-07-21 14:21:49
浓度多少才算不低呢？  另外，条带亮不就是浓度高么？...

看测序公司要求浓度是多少。胶回收电泳后用MARKER可以大致估算出回收DNA的浓度，有时看起来亮，但浓度不一定高

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13楼2017-07-21 14:33:29
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胖栋

至尊木虫 (文坛精英)
★
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支持并祝福了
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15楼2017-07-21 14:40:37
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草溪河

铁虫 (著名写手)
★
gaohuihui(金币+1): 谢谢参与
引物有能没有可能有问题，送错了

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36楼2017-07-21 17:24:34
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