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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 做过植物多糖的高手请进
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神雕哥

木虫 (正式写手)

[求助] 做过植物多糖的高手请进 已有2人参与

本人用50%乙醇提取植物中的低分子量多糖。植物经无水乙醇脱脂后，残渣干燥后，用50%乙醇提取低分子量多糖，提取液经脱蛋白，脱色后，加无水乙醇至醇浓度90%左右醇沉，得沉淀加水复溶后冻干，冻干样品过DEAE-Sepharose FF(GE)时，依次用水，0.1、0.3、0.5、0.7M氯化钠洗脱，得到中性部分（得率70%左右），中性部分继续过G-75凝胶（GE）纯化的单一峰（产率70%左右），苯酚硫酸法验证收集。收集液从DEAE-Sepharose FF(GE)和G-75凝胶纯化时，都显淡淡的蓝色（见图），不知道怎么回事。最后G75纯化后的单峰冻干，得到的冻干物水溶性很好，而且白中透着淡淡的蓝色（见图）。有知道是什么情况的吗？
还有就是冻干品我称取1mg溶于10mL水后，用苯酚硫酸法测定时，显色很浅，全波长扫描时在480nm有最大吸收峰，但吸收比较弱，我用相同浓度的葡萄糖做苯酚硫酸时，颜色正常，比较深。
综上问题1：样品为什么会带有淡淡的蓝色（自始至终没接触过其他带有颜色的物质）
      问题2：苯酚硫酸法显色为什么很弱
     问题3：我怀疑我得到的样品不是糖类，但是我是按照多糖提取分离的方法处理的。如果不是多糖，可能是什么物质
请大家帮忙解惑。
做过植物多糖的高手请进
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做过植物多糖的高手请进-1
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1楼 2017-07-19 14:58:22
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唐跳跳_hero

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
神雕哥: 金币+10, ★有帮助 2017-08-01 15:20:31
样品带有蓝色可能是你的样品本身有颜色，但是脱色不完全，你在95%乙醇醇沉多糖时，你的糖有颜色吗？冻干后有颜色吗？这个你需要查证一下，另外用苯酚硫酸法检测多糖时显色很浅，可能是你的样品配置的浓度太低，一般来说浓度为0.1-0.01mg/ml最为适宜
还有一种可能会不会是楼主的样品含糖量太低，加上操作过程中的损耗，所以多糖的得率很低
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2楼2017-07-31 15:29:14
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神雕哥

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 唐跳跳_hero at 2017-07-31 15:29:14
样品带有蓝色可能是你的样品本身有颜色，但是脱色不完全，你在95%乙醇醇沉多糖时，你的糖有颜色吗？冻干后有颜色吗？这个你需要查证一下，另外用苯酚硫酸法检测多糖时显色很浅，可能是你的样品配置的浓度太低，一般 ...

醇沉多糖时，多糖是黄色，水溶冻干后也是黄色，苯酚硫酸法我配的浓度为0.1mg/mL
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3楼2017-08-01 15:21:48
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celan

专家顾问 (知名作家)

从事NMR和有机化合物结构鉴定

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
神雕哥: 金币+15, ★★★★★最佳答案 2017-08-01 16:03:32
楼主真是辛苦了，大热天的。
取50%乙醇提取物测定1H和13CNMR，是不是多糖，杂质情况如何，很容易判定，然后是定继续化学实验的步骤。方便快捷，我就是这样做的。
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4楼2017-08-01 15:32:01
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celan

专家顾问 (知名作家)

从事NMR和有机化合物结构鉴定

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
神雕哥: 金币+20, ★★★很有帮助 2017-08-02 10:05:13
引用回帖:
5楼: Originally posted by 神雕哥 at 2017-08-01 15:59:18
谢谢，请问可以加个好友吗...

可以。我大学也是药学毕业，80年代初就开始从事NMR和波谱综合解析。用NMR监测样品结构类型，混合程度，杂质情况非常有用，通常比学校专业课学习的颜色反应判断化合物类型更有用。有一点很重要，就是要有NMR知识。。。。。
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神雕哥
6楼2017-08-01 16:55:40
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普通回帖

神雕哥

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by celan at 2017-08-01 15:32:01
楼主真是辛苦了，大热天的。
取50%乙醇提取物测定1H和13CNMR，是不是多糖，杂质情况如何，很容易判定，然后是定继续化学实验的步骤。方便快捷，我就是这样做的。

谢谢，请问可以加个好友吗
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5楼2017-08-01 15:59:18
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dseager

新虫 (小有名气)
做个定性鉴别啊

发自小木虫Android客户端
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7楼2017-08-02 00:00:39
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dseager

新虫 (小有名气)
奈酚实验

发自小木虫Android客户端
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8楼2017-08-02 00:01:00
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神雕哥

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by dseager at 2017-08-02 00:00:39
做个定性鉴别啊

能说具体点吗
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9楼2017-08-02 09:14:55
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神雕哥

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by dseager at 2017-08-02 00:01:00
奈酚实验

谢谢，你说的是molish反应吧，我做了，取5gα奈酚用95%乙醇溶解至100mL。取样品溶液1mL，加2滴molish试剂，再加1mL浓硫酸，中间出现了个紫色的环。
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10楼2017-08-02 09:53:41
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