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神雕哥

木虫 (正式写手)

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[求助] 做过植物多糖的高手请进已有2人参与

本人用50%乙醇提取植物中的低分子量多糖。植物经无水乙醇脱脂后，残渣干燥后，用50%乙醇提取低分子量多糖，提取液经脱蛋白，脱色后，加无水乙醇至醇浓度90%左右醇沉，得沉淀加水复溶后冻干，冻干样品过DEAE-Sepharose FF(GE)时，依次用水，0.1、0.3、0.5、0.7M氯化钠洗脱，得到中性部分（得率70%左右），中性部分继续过G-75凝胶（GE）纯化的单一峰（产率70%左右），苯酚硫酸法验证收集。收集液从DEAE-Sepharose FF(GE)和G-75凝胶纯化时，都显淡淡的蓝色（见图），不知道怎么回事。最后G75纯化后的单峰冻干，得到的冻干物水溶性很好，而且白中透着淡淡的蓝色（见图）。有知道是什么情况的吗？
还有就是冻干品我称取1mg溶于10mL水后，用苯酚硫酸法测定时，显色很浅，全波长扫描时在480nm有最大吸收峰，但吸收比较弱，我用相同浓度的葡萄糖做苯酚硫酸时，颜色正常，比较深。
综上问题1：样品为什么会带有淡淡的蓝色（自始至终没接触过其他带有颜色的物质）
问题2：苯酚硫酸法显色为什么很弱
问题3：我怀疑我得到的样品不是糖类，但是我是按照多糖提取分离的方法处理的。如果不是多糖，可能是什么物质
请大家帮忙解惑。

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1楼2017-07-19 14:58:22

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唐跳跳_hero

铜虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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神雕哥: 金币+10, ★有帮助 2017-08-01 15:20:31

样品带有蓝色可能是你的样品本身有颜色，但是脱色不完全，你在95%乙醇醇沉多糖时，你的糖有颜色吗？冻干后有颜色吗？这个你需要查证一下，另外用苯酚硫酸法检测多糖时显色很浅，可能是你的样品配置的浓度太低，一般来说浓度为0.1-0.01mg/ml最为适宜
还有一种可能会不会是楼主的样品含糖量太低，加上操作过程中的损耗，所以多糖的得率很低

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2楼2017-07-31 15:29:14

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神雕哥

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 唐跳跳_hero at 2017-07-31 15:29:14
样品带有蓝色可能是你的样品本身有颜色，但是脱色不完全，你在95%乙醇醇沉多糖时，你的糖有颜色吗？冻干后有颜色吗？这个你需要查证一下，另外用苯酚硫酸法检测多糖时显色很浅，可能是你的样品配置的浓度太低，一般 ...

醇沉多糖时，多糖是黄色，水溶冻干后也是黄色，苯酚硫酸法我配的浓度为0.1mg/mL

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3楼2017-08-01 15:21:48

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