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肺肺是最棒的

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请问一下每次跑电泳的时候10kda以下都有很长的一条条带这是怎么回事？而我需要的目的条带是10kda的另外，样品诱导前和诱导后呈果冻状，很难用小枪吸出来需要怎么解决谢谢各位～?

小肽电泳

小肽电泳-1

小肽电泳-2

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1楼 2017-07-17 23:37:52

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zhouxfd

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-18 07:45:09

从图中我没有看到10 kDa 的地方有带，最下面的带不用担心，可能是loading buffer 造成的，另外你可以跑个15%的胶，区分度好一些。
样品要充分煮后才不会粘稠

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肺肺是最棒的

8楼2017-07-18 01:03:45

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肺肺是最棒的

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8楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-18 01:03:45
从图中我没有看到10 kDa 的地方有带，最下面的带不用担心，可能是loading buffer 造成的，另外你可以跑个15%的胶，区分度好一些。
样品要充分煮后才不会粘稠

像这张跑的，按理说我们的目的蛋白是单体的话，条带应该在10kd以下，可是现在目前只有17kd有条带，100度加热跑的也还在那。不明白为什么10kda诱导不出来，……而且10kda以下每次跑都是有很长的一条条带
?

小肽电泳-3

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9楼2017-07-19 20:56:21

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8楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-18 01:03:45
从图中我没有看到10 kDa 的地方有带，最下面的带不用担心，可能是loading buffer 造成的，另外你可以跑个15%的胶，区分度好一些。
样品要充分煮后才不会粘稠

样品是恒温水浴40度煮了30分钟，17kda有条带后样品是100度煮了5分钟，但是17kda条带没变。

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10楼2017-07-19 21:14:13

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zhouxfd

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9楼: Originally posted by 肺肺是最棒的 at 2017-07-19 20:56:21
像这张跑的，按理说我们的目的蛋白是单体的话，条带应该在10kd以下，可是现在目前只有17kd有条带，100度加热跑的也还在那。不明白为什么10kda诱导不出来，……而且10kda以下每次跑都是有很长的一条条带
?

...

最好跑15%胶，另外一定要100度水煮5分钟以上，可以让所有蛋白变性失去三级结构，那样才能准确看出分子量。如果你表达蛋白有tag或构建的时候还有其他序列一起表达的也要算分子量，说不定能达到17K

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肺肺是最棒的

11楼2017-07-20 00:36:12

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11楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-20 00:36:12
最好跑15%胶，另外一定要100度水煮5分钟以上，可以让所有蛋白变性失去三级结构，那样才能准确看出分子量。如果你表达蛋白有tag或构建的时候还有其他序列一起表达的也要算分子量，说不定能达到17K...

有用100度煮了5分钟，然后离心上样，但是结果跟40度水浴30分钟跑出来的一样。不明白为什么诱导不出来T_T

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12楼2017-07-20 11:14:42

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肺肺是最棒的

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11楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-20 00:36:12
最好跑15%胶，另外一定要100度水煮5分钟以上，可以让所有蛋白变性失去三级结构，那样才能准确看出分子量。如果你表达蛋白有tag或构建的时候还有其他序列一起表达的也要算分子量，说不定能达到17K...

胶是没问题的

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13楼2017-07-20 11:15:37

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zhouxfd

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13楼: Originally posted by 肺肺是最棒的 at 2017-07-20 11:15:37
胶是没问题的
...

做一下WB看看，是不是17K的那个蛋白就是你要的

14楼2017-07-21 00:16:14

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简单回复

wulongwoaini2楼

2017-07-17 23:38 回复

肺肺是最棒的(金币+2): 谢谢参与

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baijiazi3楼

2017-07-17 23:38 回复

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万邦翻译4楼

2017-07-17 23:40 回复

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limi10095楼

2017-07-17 23:45 回复

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adjoq6楼

2017-07-17 23:46 回复

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feifeibang067楼

2017-07-17 23:58 回复

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