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肺肺是最棒的

新虫 (初入文坛)
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小肽电泳
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请问一下每次跑电泳的时候10kda以下都有很长的一条条带这是怎么回事？而我需要的目的条带是10kda的 另外，样品诱导前和诱导后呈果冻状，很难用小枪吸出来需要怎么解决 谢谢各位～?

小肽电泳


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1楼 2017-07-17 23:37:52
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zhouxfd

木虫 (正式写手)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-18 07:45:09
从图中我没有看到10 kDa  的地方有带，最下面的带不用担心， 可能是loading buffer 造成的 ， 另外你可以跑个15%的胶，区分度好一些。
样品要充分煮后才不会粘稠
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肺肺是最棒的
8楼2017-07-18 01:03:45
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肺肺是最棒的

新虫 (初入文坛)
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8楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-18 01:03:45
从图中我没有看到10 kDa  的地方有带，最下面的带不用担心， 可能是loading buffer 造成的 ， 另外你可以跑个15%的胶，区分度好一些。
样品要充分煮后才不会粘稠

像这张跑的，按理说我们的目的蛋白是单体的话 ，条带应该在10kd以下，可是现在目前只有17kd有条带 ，100度加热跑的也还在那 。不明白为什么10kda诱导不出来，……而且10kda以下每次跑都是有很长的一条条带
?
小肽电泳-3



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9楼2017-07-19 20:56:21
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肺肺是最棒的

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-18 01:03:45
从图中我没有看到10 kDa  的地方有带，最下面的带不用担心， 可能是loading buffer 造成的 ， 另外你可以跑个15%的胶，区分度好一些。
样品要充分煮后才不会粘稠

样品是恒温水浴40度煮了30分钟，17kda有条带后样品是100度煮了5分钟，但是17kda条带没变。

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10楼2017-07-19 21:14:13
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zhouxfd

木虫 (正式写手)
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9楼: Originally posted by 肺肺是最棒的 at 2017-07-19 20:56:21
像这张跑的，按理说我们的目的蛋白是单体的话 ，条带应该在10kd以下，可是现在目前只有17kd有条带 ，100度加热跑的也还在那 。不明白为什么10kda诱导不出来，……而且10kda以下每次跑都是有很长的一条条带
?

...

最好跑15%胶，另外一定要100度水煮5分钟以上，可以让所有蛋白变性失去三级结构，那样才能准确看出分子量。 如果你表达蛋白有tag或构建的时候还有其他序列一起表达的也要算分子量，说不定能达到17K
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肺肺是最棒的
11楼2017-07-20 00:36:12
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肺肺是最棒的

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
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11楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-20 00:36:12
最好跑15%胶，另外一定要100度水煮5分钟以上，可以让所有蛋白变性失去三级结构，那样才能准确看出分子量。 如果你表达蛋白有tag或构建的时候还有其他序列一起表达的也要算分子量，说不定能达到17K...

有用100度煮了5分钟，然后离心上样，但是结果跟40度水浴30分钟跑出来的一样。不明白为什么诱导不出来T_T

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12楼2017-07-20 11:14:42
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肺肺是最棒的

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-20 00:36:12
最好跑15%胶，另外一定要100度水煮5分钟以上，可以让所有蛋白变性失去三级结构，那样才能准确看出分子量。 如果你表达蛋白有tag或构建的时候还有其他序列一起表达的也要算分子量，说不定能达到17K...

胶是没问题的

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13楼2017-07-20 11:15:37
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zhouxfd

木虫 (正式写手)
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引用回帖:
13楼: Originally posted by 肺肺是最棒的 at 2017-07-20 11:15:37
胶是没问题的
...

做一下WB看看，是不是17K的那个蛋白就是你要的
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14楼2017-07-21 00:16:14
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wulongwoaini2楼
2017-07-17 23:38   回复  
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baijiazi3楼
2017-07-17 23:38   回复  
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万邦翻译4楼
2017-07-17 23:40   回复  
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limi10095楼
2017-07-17 23:45   回复  
肺肺是最棒的(金币+1): 谢谢参与
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adjoq6楼
2017-07-17 23:46   回复  
肺肺是最棒的(金币+1): 谢谢参与
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feifeibang067楼
2017-07-17 23:58   回复  
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