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文竹子
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反转录产生的cDNA,经消化去除RNA后,怎样将其中的ssDNA纯化出来?各位虫友们有没有好的建议或意见?谢谢啦!
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2017-07-17 21:38:00
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2017-07-17 21:38:39
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比较着急,如果有懂得的虫友,请不吝赐教!
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9楼
2017-07-17 21:44:22
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果没有DNA polymerase activity的话不直接就是单链吗,为什么需要纯化?
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10楼
2017-07-18 01:07:41
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10楼
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zhouxfd
at 2017-07-18 01:07:41
如果没有DNA polymerase activity的话不直接就是单链吗,为什么需要纯化?
因为一下步有其他用途,需要更换buffer
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11楼
2017-07-18 09:04:05
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流
2017-07-19 07:44:59
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文竹子
at 2017-07-18 09:04:05
因为一下步有其他用途,需要更换buffer
...
可以直接做dialysis,另外即便是双链,做变性后立刻放在冰上不是也行?
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12楼
2017-07-18 10:17:04
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zhouxfd
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可以直接做dialysis,另外即便是双链,做变性后立刻放在冰上不是也行?...
谢谢你的建议。但好像都没有很好的满足我的实验要求。透析的效率应该不高,而且我的片段长度只有600nt,并且样本量很少。另外你说的双链DNA的变性的方法,也不太行。这样没法将两条链分开。
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13楼
2017-07-18 10:44:21
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13楼
:
Originally posted by
文竹子
at 2017-07-18 10:44:21
谢谢你的建议。但好像都没有很好的满足我的实验要求。透析的效率应该不高,而且我的片段长度只有600nt,并且样本量很少。另外你说的双链DNA的变性的方法,也不太行。这样没法将两条链分开。
...
两条链不一样?
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14楼
2017-07-19 00:06:41
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petty04
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这种情况应该可以跑7%-8%的变性PAGE胶来分离纯化你的600nt左右的单链DNA。
你还可以在胶上放上单链的ssDNA ladder,染色后判断逆转录是否成功。我知道有一家做单链ladder挺好的,应该是cnbioruler。cn 你可以去看看。
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15楼
2017-08-04 16:11:49
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宁静安好
2楼
2017-07-17 21:38
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txwznb
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2017-07-17 21:38
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木木的头
4楼
2017-07-17 21:38
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cffyau
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小婷。。。
6楼
2017-07-17 21:38
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太阳当空照8
8楼
2017-07-17 21:39
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