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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » ssDNA的纯化
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文竹子

新虫 (初入文坛)
已领完
ssDNA的纯化
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反转录产生的cDNA，经消化去除RNA后，怎样将其中的ssDNA纯化出来？各位虫友们有没有好的建议或意见？谢谢啦！

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1楼 2017-07-17 21:38:00
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木木的头

木虫 (知名作家)
不懂帮顶

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7楼2017-07-17 21:38:39
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文竹子

新虫 (初入文坛)
比较着急，如果有懂得的虫友，请不吝赐教！

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9楼2017-07-17 21:44:22
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zhouxfd

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果没有DNA polymerase activity的话不直接就是单链吗，为什么需要纯化？
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10楼2017-07-18 01:07:41
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文竹子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-18 01:07:41
如果没有DNA polymerase activity的话不直接就是单链吗，为什么需要纯化？

因为一下步有其他用途，需要更换buffer

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11楼2017-07-18 09:04:05
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zhouxfd

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-19 07:44:59
引用回帖:
11楼: Originally posted by 文竹子 at 2017-07-18 09:04:05
因为一下步有其他用途，需要更换buffer
...

可以直接做dialysis，另外即便是双链，做变性后立刻放在冰上不是也行？
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12楼2017-07-18 10:17:04
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文竹子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-18 10:17:04
可以直接做dialysis，另外即便是双链，做变性后立刻放在冰上不是也行？...

谢谢你的建议。但好像都没有很好的满足我的实验要求。透析的效率应该不高，而且我的片段长度只有600nt，并且样本量很少。另外你说的双链DNA的变性的方法，也不太行。这样没法将两条链分开。

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13楼2017-07-18 10:44:21
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zhouxfd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 文竹子 at 2017-07-18 10:44:21
谢谢你的建议。但好像都没有很好的满足我的实验要求。透析的效率应该不高，而且我的片段长度只有600nt，并且样本量很少。另外你说的双链DNA的变性的方法，也不太行。这样没法将两条链分开。
...

两条链不一样？
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14楼2017-07-19 00:06:41
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petty04

新虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这种情况应该可以跑7%-8%的变性PAGE胶来分离纯化你的600nt左右的单链DNA。

你还可以在胶上放上单链的ssDNA ladder，染色后判断逆转录是否成功。我知道有一家做单链ladder挺好的，应该是cnbioruler。cn  你可以去看看。
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15楼2017-08-04 16:11:49
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宁静安好2楼
2017-07-17 21:38   回复  
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txwznb3楼
2017-07-17 21:38   回复  
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木木的头4楼
2017-07-17 21:38   回复  
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cffyau5楼
2017-07-17 21:38   回复  
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小婷。。。6楼
2017-07-17 21:38   回复  
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太阳当空照88楼
2017-07-17 21:39   回复  
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