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匿名

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晋鹏

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guoxhyy: 金币+2 2017-07-18 09:32:14
1、少没关系,只要有正确的就可以了。

2、感受态不好,也可能是没有连上。

3、看看是不是质粒自连: 作连接体系的时候,作阴性对照。把目标片段替换成水,和酶切过的质粒16℃过夜。转化后看看有没有长出菌落。
及时行乐,人生不留遗憾!
2楼2017-07-17 12:14:44
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-19 07:42:48
推荐用Gibson方法构建,另外质粒太大热激效率可能降低,推荐用点击,不过产物需要透析脱盐,另外9K也不算太大啊,是不是low copy number plasmid
4楼2017-07-18 00:49:30
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by guoxhyy at 2017-07-18 09:34:38
这个方法没听过,一会我查查,你说的点击是什么意思?表示不懂。9K理论上是高拷贝。...

sorry,是电击,转化效率好。质粒拷贝数和大小没关系,指的是在一个细菌单细胞内有几个质粒分子
6楼2017-07-18 10:15:35
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匿名

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3楼2017-07-17 13:01:32
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7楼2017-07-18 10:19:43
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zhouxfd

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【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by guoxhyy at 2017-07-18 10:19:43
嗯嗯,我在准备电转化的感受态,你之前做过吗,有没有操作步骤,我在网上搜到的,感觉都不太一样,如果你有,可否传一份给我,万分感激!
...

菌养到对数期后用10% 甘油洗三四次,之后冻起来就行了,主要是不能有盐
8楼2017-07-19 00:08:39
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9楼2017-07-19 06:58:06
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

连接产物也要脱盐,要不会击爆
10楼2017-07-19 12:46:09
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