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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于转化后长菌少的烦恼
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匿名

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1楼 2017-07-17 10:42:32
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by guoxhyy at 2017-07-18 10:19:43
嗯嗯，我在准备电转化的感受态，你之前做过吗，有没有操作步骤，我在网上搜到的，感觉都不太一样，如果你有，可否传一份给我，万分感激！
...

菌养到对数期后用10% 甘油洗三四次，之后冻起来就行了，主要是不能有盐
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8楼2017-07-19 00:08:39
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
guoxhyy: 金币+2 2017-07-18 09:32:14
1、少没关系，只要有正确的就可以了。

2、感受态不好，也可能是没有连上。

3、看看是不是质粒自连： 作连接体系的时候，作阴性对照。把目标片段替换成水，和酶切过的质粒16℃过夜。转化后看看有没有长出菌落。
赞一下(2人) 回复此楼
及时行乐，人生不留遗憾！
2楼2017-07-17 12:14:44
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匿名

用户注销 (正式写手)
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3楼2017-07-17 13:01:32
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-19 07:42:48
推荐用Gibson方法构建，另外质粒太大热激效率可能降低，推荐用点击，不过产物需要透析脱盐，另外9K也不算太大啊，是不是low copy number plasmid
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2017-07-18 00:49:30
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