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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 限制性内切酶稀释
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微笑漩涡

新虫 (著名写手)

[交流] 限制性内切酶稀释

限制性内切酶稀释时用10×buffer稀释后储存于－20度，在多长时间内使用活性不至于下降太多啊？
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1楼 2009-01-29 09:56:53
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
为什么要稀释呢？
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
2楼2009-01-29 10:18:50
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微笑漩涡

新虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 香菱儿 at 2009-1-29 10:18:
为什么要稀释呢？

我要部分酶切DNA，而这个酶是识别4碱基的，理论上256bp就有一个酶切位点，所以如果酶浓度大的化，几分钟就把DNA切得太小了。所以要稀释，但是不知道稀释后的酶在多长时间内使用有效。

比如我在20ul的体系中就用0.1U，但是酶储液是10U/ul，不稀释的话，用枪根本没法吸啊。

[ Last edited by 微笑漩涡 on 2009-1-29 at 10:31 ]
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3楼2009-01-29 10:27:36
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-31 14:15
不稀释，控制时间不是也可以吗
酶切是酶在时间上累积的结果
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4楼2009-01-30 23:43:54
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
补足甘油(否则会结冰的),应该问题不大
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5楼2009-01-31 19:37:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
……0.1U
兄弟你也太节省了……
我一般都用1U的
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6楼2009-01-31 22:31:45
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微笑漩涡

新虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-1-31 22:31:
……0.1U
兄弟你也太节省了……
我一般都用1U的

我也不想省啊，但是没有办法啊。

20ul的酶切体系中，DNA3ul（量为1ug）。这样的话酶就不能多加了，要是加1U

的话，一分钟就全没有了。提高体系中DNA的量不知道可行不。比如提高到2－

3ug。相应的酶也就多加一些了。

你在作四碱基识别酶切的时候也是用1U么？体系及其中的DNA能给我些建议么
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7楼2009-02-01 01:29:29
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
==b
反正切开不就行了，管他多少分钟……
20ul体系确实是用1U酶切1ug DNA/小时啊~
不就是酶活的定义？
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8楼2009-02-01 09:21:11
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微笑漩涡

新虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-2-1 09:21:
==b
反正切开不就行了，管他多少分钟……
20ul体系确实是用1U酶切1ug DNA/小时啊~
不就是酶活的定义？

但是我要的是部分酶切，要目的片段集中在4－10KB。呵呵，我试试看吧。这样

的话得精确到分才行。
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9楼2009-02-01 14:29:33
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
那就不要用20ul体系切了
200ul体系切不就相当于稀释了酶了？
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10楼2009-02-01 18:42:35
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