应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 限制性内切酶稀释
101/1返回列表
查看: 522  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

微笑漩涡

新虫 (著名写手)

[交流] 限制性内切酶稀释

限制性内切酶稀释时用10×buffer稀释后储存于－20度，在多长时间内使用活性不至于下降太多啊？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-01-29 09:56:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
为什么要稀释呢？
赞一下 回复此楼
漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
2楼2009-01-29 10:18:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

微笑漩涡

新虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 香菱儿 at 2009-1-29 10:18:
为什么要稀释呢？

我要部分酶切DNA，而这个酶是识别4碱基的，理论上256bp就有一个酶切位点，所以如果酶浓度大的化，几分钟就把DNA切得太小了。所以要稀释，但是不知道稀释后的酶在多长时间内使用有效。

比如我在20ul的体系中就用0.1U，但是酶储液是10U/ul，不稀释的话，用枪根本没法吸啊。

[ Last edited by 微笑漩涡 on 2009-1-29 at 10:31 ]
赞一下 回复此楼
3楼2009-01-29 10:27:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-31 14:15
不稀释，控制时间不是也可以吗
酶切是酶在时间上累积的结果
赞一下(6人) 回复此楼
4楼2009-01-30 23:43:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)
补足甘油(否则会结冰的),应该问题不大
赞一下 回复此楼
5楼2009-01-31 19:37:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
……0.1U
兄弟你也太节省了……
我一般都用1U的
赞一下 回复此楼
6楼2009-01-31 22:31:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

微笑漩涡

新虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-1-31 22:31:
……0.1U
兄弟你也太节省了……
我一般都用1U的

我也不想省啊，但是没有办法啊。

20ul的酶切体系中，DNA3ul（量为1ug）。这样的话酶就不能多加了，要是加1U

的话，一分钟就全没有了。提高体系中DNA的量不知道可行不。比如提高到2－

3ug。相应的酶也就多加一些了。

你在作四碱基识别酶切的时候也是用1U么？体系及其中的DNA能给我些建议么
赞一下 回复此楼
7楼2009-02-01 01:29:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
==b
反正切开不就行了，管他多少分钟……
20ul体系确实是用1U酶切1ug DNA/小时啊~
不就是酶活的定义？
赞一下 回复此楼
8楼2009-02-01 09:21:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

微笑漩涡

新虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-2-1 09:21:
==b
反正切开不就行了，管他多少分钟……
20ul体系确实是用1U酶切1ug DNA/小时啊~
不就是酶活的定义？

但是我要的是部分酶切，要目的片段集中在4－10KB。呵呵，我试试看吧。这样

的话得精确到分才行。
赞一下 回复此楼
9楼2009-02-01 14:29:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
那就不要用20ul体系切了
200ul体系切不就相当于稀释了酶了？
赞一下 回复此楼
10楼2009-02-01 18:42:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 微笑漩涡 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 329求调剂 +10 想上学吖吖 2026-03-19 10/500 2026-03-26 20:21 by sanrepian
[考研] 07化学280分求调剂 +8 722865 2026-03-23 8/400 2026-03-26 20:00 by 不吃魚的貓
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +7 丹青奶盖 2026-03-26 7/350 2026-03-26 19:18 by macy2011
[考研] 312求调剂 +8 上岸吧ZJY 2026-03-22 12/600 2026-03-26 18:49 by muchong357
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-26 6/300 2026-03-26 18:03 by 邱gl
[考研] 0856求调剂 +8 zhn03 2026-03-25 9/450 2026-03-26 13:42 by zzll406
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工 264分各科过A区国家线 +6 哈哈157349 2026-03-21 6/300 2026-03-26 10:39 by 醉在风里
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 材料学硕，求调剂 6+4 糖葫芦888ll 2026-03-22 9/450 2026-03-25 11:19 by greychen00
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +4 13831862839 2026-03-24 5/250 2026-03-25 09:47 by 无际的草原
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程（085601） +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[考研] 327求调剂 +5 prayer13 2026-03-23 5/250 2026-03-23 22:11 by 星空星月
[考研] 材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭