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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE问题 蛋白带重影
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zhaer

木虫 (小有名气)

[交流] SDS-PAGE问题 蛋白带重影

跑出来的样品带有重影，确切的说已经不重叠了，是两条看起来一样的带（应该是同一个蛋白），这个现象marker也很明显，正常的marker条带下还有一条带，请问这是怎么回事啊？

[ Last edited by zhaer on 2009-1-29 at 02:38 ]
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1楼 2009-01-28 23:29:57
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shadowfly

木虫 (小有名气)
是不是加完上样缓冲液后没有煮沸？
最好是发图看一下，是所有的蛋白下面都有重影还是某些特定的才有？
再考虑一下胶的问题，配制胶的药品都重配一下吧

才初三就又开始试验啦？致敬一下····
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2楼2009-01-29 00:26:47
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zhaer

木虫 (小有名气)
照得有点不清楚，不过还能看见，样品也有双带不过marker更明显些。
基本上每条带都有，什么原因哪，很晕。贮液都是新配的。。。

[ Last edited by zhaer on 2009-1-29 at 02:41 ]
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3楼2009-01-29 02:39:26
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shadowfly

木虫 (小有名气)
方法是和平时一样吗？包括电压、室温等等？

还有，上样前是否加上样buffer后煮沸了？包括marker？

[ Last edited by shadowfly on 2009-1-29 at 18:07 ]
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4楼2009-01-29 18:04:53
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zhaer

木虫 (小有名气)
是啊，我用的恒流，实验室恒温20度，样品和marker预处理后放在冰箱里的，使用前又煮了一两分钟。
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5楼2009-01-29 21:48:01
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cooldog520

铜虫 (初入文坛)
缓冲液用了几次，我一般用两次，用多了可能会出现这样情况
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6楼2009-01-29 23:23:29
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zhaer

木虫 (小有名气)
哦，我是现用现配 pH 8.3，只用一次，电流电压有没有关系啊

[ Last edited by zhaer on 2009-1-30 at 05:37 ]
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7楼2009-01-30 01:45:30
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shadowfly

木虫 (小有名气)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-31 13:52
电流电压应该是有关系，一般最好能低一些，恒流的话就按照1cm胶/1mA跑比较好，分辨率比较高。
但是你原来跑都没问题，就不倾向于是这个的问题了。不过你也可以试试低电流跑跑看
再跑一次，看看还有这问题不
再有，确定一下各药品是否都没有问题，包括丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺，APs，甚至包括水，都确定一下
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8楼2009-01-30 10:34:43
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zhaer

木虫 (小有名气)
嗯，小电流应该是好些。今天又跑了下，制胶前测了下分离胶pH差一点不到8.8，调回去以后电流用40 mA（双胶），貌似重影现象减少了，不过还是有，只是没那么明显了。极其不明白为什么，除了本身就是两种蛋白还有什么原因能跑成两条带。

[ Last edited by zhaer on 2009-1-30 at 10:57 ]
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9楼2009-01-30 10:51:38
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shadowfly

木虫 (小有名气)
我认为一般蛋白重影主要是分辨率差的问题，主要是缓冲液和药品时间长了，也有些是电压和电流比较大的问题，还有可能是样品处理的问题，不好一概而论。

marker是哪个公司的？换一个再试试

······该不会是你的上样缓冲液的问题吧，要不你用个预染的marker试试，确定一下·
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10楼2009-01-30 23:57:27
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