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543347014

新虫 (小有名气)

[交流] 菌落PCR

为什么我的菌落PCR P出了两条带,有一条是与我的目的片段大小一致的带,一条是不一致的,请问可以接着做后续工作吗?

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zhouxfd

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
把质粒提出来用酶切鉴定吧
4楼2017-07-15 00:34:48
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PattyGao

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你blast一下你的引物,是不是特异性的,有可能特异性不强
5楼2017-07-15 10:50:09
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cry_2013

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
菌落PCR有一定的假阳性率,建议你再提质粒酶切鉴定一下。
6楼2017-07-15 11:03:06
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543347014

新虫 (小有名气)

我酶切监测了,一共两个,成功了一个

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9楼2017-07-20 12:35:35
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luckydog52

木虫 (著名写手)

自信源于一次次成功的积累
2楼2017-07-14 22:02:26
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543347014

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by luckydog52 at 2017-07-14 22:02:26
非特异扩增

请问我的那个片段连接成功了没

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3楼2017-07-14 22:16:40
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老猫飞上天

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也出现了这种情况。菌落pcr跑出来有很多条条带,而目的条带处很淡。现在准备提出质粒酶切再看一次。我觉得我的引物没有问题,请问下假阳性是什么意思

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7楼2017-07-17 15:51:52
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老猫飞上天

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我菌落pcr有多条杂带,但是将质粒提出来之后pcr也跟前面一样,有杂带,现在准备酶切再跑一次看看

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8楼2017-07-17 15:54:30
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543347014

新虫 (小有名气)

10楼2017-07-20 12:37:12
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