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DJ0505

新虫 (初入文坛)

[求助] 亲和层析 已有1人参与

纯化抗体，亲和层析出现了问题，柱子上挂住的IgG洗脱不下来,怎么办？求助
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1楼 2017-07-13 18:12:41
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-07-13 22:48:37
1、洗脱：分别用PH4.6，0.2，0.5，0.8M乙酸盐缓冲液洗脱，第一峰含有Fab，第二峰为未除去的杂质包括降解肽、未除去之IgG，第三峰则为Fc。收集第三峰，浓缩，做SDS-PAGE鉴定。

2、经过试验得到结果：培养上清加入0.5M NaCl能够结合proteinA ，PH3.0能够洗脱下来。然后PH7.0的buffer过Q HP，牛IgG在流出液中，mouse IgG用300mM NaCl洗脱能够等到。
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及时行乐，人生不留遗憾！
2楼2017-07-13 19:56:47
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DJ0505

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-13 19:56:47
1、洗脱：分别用PH4.6，0.2，0.5，0.8M乙酸盐缓冲液洗脱，第一峰含有Fab，第二峰为未除去的杂质包括降解肽、未除去之IgG，第三峰则为Fc。收集第三峰，浓缩，做SDS-PAGE鉴定。

2、经过试验得到结果：培养上清加入 ...

我是用ProteinG的柱子做的，洗脱之前用分光光度计测了下浓度为1.2 mg/ml,但是洗脱下来的IgE几乎没有，所以是不是都在柱子上面，这是什么原因,能解惑吗
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3楼2017-07-13 20:53:08
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