应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 亲和层析
31/1返回列表
查看: 980  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

DJ0505

新虫 (初入文坛)

[求助] 亲和层析 已有1人参与

纯化抗体，亲和层析出现了问题，柱子上挂住的IgG洗脱不下来,怎么办？求助
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-07-13 18:12:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-07-13 22:48:37
1、洗脱：分别用PH4.6，0.2，0.5，0.8M乙酸盐缓冲液洗脱，第一峰含有Fab，第二峰为未除去的杂质包括降解肽、未除去之IgG，第三峰则为Fc。收集第三峰，浓缩，做SDS-PAGE鉴定。

2、经过试验得到结果：培养上清加入0.5M NaCl能够结合proteinA ，PH3.0能够洗脱下来。然后PH7.0的buffer过Q HP，牛IgG在流出液中，mouse IgG用300mM NaCl洗脱能够等到。
赞一下(2人) 回复此楼
及时行乐，人生不留遗憾！
2楼2017-07-13 19:56:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DJ0505

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-13 19:56:47
1、洗脱：分别用PH4.6，0.2，0.5，0.8M乙酸盐缓冲液洗脱，第一峰含有Fab，第二峰为未除去的杂质包括降解肽、未除去之IgG，第三峰则为Fc。收集第三峰，浓缩，做SDS-PAGE鉴定。

2、经过试验得到结果：培养上清加入 ...

我是用ProteinG的柱子做的，洗脱之前用分光光度计测了下浓度为1.2 mg/ml,但是洗脱下来的IgE几乎没有，所以是不是都在柱子上面，这是什么原因,能解惑吗
赞一下 回复此楼
3楼2017-07-13 20:53:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 DJ0505 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289材料与化工（085600）B区求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:20 by mx.yue
[考研] 0703化学调剂，求导师收 +7 天天好运来上岸� 2026-03-24 7/350 2026-03-24 20:26 by peike
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +3 章小鱼567 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:46 by zhouxuan..
[考研] 求调剂 +6 研研，接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 291求调剂 +3 HanBeiNingZC 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:34 by barlinike
[考研] 300求调剂，材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 070300，一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +11 枫桥ZL 2026-03-18 13/650 2026-03-22 20:26 by edmund7
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 一志愿中南化学（0703）总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭