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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » DNA溶液测序
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jianshuilan

铜虫 (初入文坛)

[求助] DNA溶液测序 已有2人参与

求助：
     提取的粪便DNA溶液，原液1ul，20ul rTaq反应体系，没有条带。DNA溶液稀释至少10倍PCR后有条带。DNA浓度50-200ng/ul不等，260/280在1.4左右，这样的DNA溶液可以拿去测序吗？
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1楼 2017-07-12 09:16:36
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、DNA纯度的判断根据OD260/OD280的比值判断，符合要求纯度高的纯化DNA其OD260/OD280在1.6~1.8之间，低于此范围表明蛋白质含量超标，高于此范围表明样品中含有RNA。

2、纯DNA：OD260/OD280≈1.8(＞1.9，表明有RNA污染；＜1.6，表明有蛋白质、酚等污染）。

3、蛋白质污染：确保不要吸入中间层及有机相。减少起始样品量，确保裂解完全、彻底。加入氯仿后首先要充分混匀，并且离心分层的离心力和时间要足够。如果所得RNA的OD260/OD280比值偏低，则用氯仿重新抽提一次，再沉淀，溶解。

4、个人建议，纯度较高的时候送，比较可靠。
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及时行乐，人生不留遗憾！
2楼2017-07-12 10:18:09
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mao081312

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个是想做什么测序的DNA，不同的测序要求不一样的
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3楼2017-07-20 22:14:01
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夏至1990

金虫 (小有名气)

小小虫
您好，最近遇到同样的问题，想质询下，最后是如何解决的，除了稀释模板，还有其他尝试吗？
赞一下 回复此楼
Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?
4楼2017-07-28 14:48:51
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