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jianshuilan

铜虫 (初入文坛)

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[求助] DNA溶液测序已有2人参与

求助：
提取的粪便DNA溶液，原液1ul，20ul rTaq反应体系，没有条带。DNA溶液稀释至少10倍PCR后有条带。DNA浓度50-200ng/ul不等，260/280在1.4左右，这样的DNA溶液可以拿去测序吗？

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1楼 2017-07-12 09:16:36

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晋鹏

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【答案】应助回帖

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1、DNA纯度的判断根据OD260/OD280的比值判断，符合要求纯度高的纯化DNA其OD260/OD280在1.6~1.8之间，低于此范围表明蛋白质含量超标，高于此范围表明样品中含有RNA。

2、纯DNA：OD260/OD280≈1.8(＞1.9，表明有RNA污染；＜1.6，表明有蛋白质、酚等污染）。

3、蛋白质污染：确保不要吸入中间层及有机相。减少起始样品量，确保裂解完全、彻底。加入氯仿后首先要充分混匀，并且离心分层的离心力和时间要足够。如果所得RNA的OD260/OD280比值偏低，则用氯仿重新抽提一次，再沉淀，溶解。

4、个人建议，纯度较高的时候送，比较可靠。