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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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玄玄子

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] CO-IP后WB条带发光液发光后,膜变黄色 已有1人参与

这张是CO-IP后做WB发光后的膜,图片从左到右,前两个箭头分别是原液和孵育后上清目的条带的位置,第三个箭头所指是洗脱液上样,发现此条带与目的条带相比要偏小,怀疑为抗体轻链,但比25kd位置要大(图中25kd位置为maker带最下一条)。我的问题主要是:1,、发光后为什么膜会变黄?这样造成了 之后的曝光不出黑色条带,黄色部分曝光结果为“空洞‘’2、因为通过曝光前两条带的比较,发现原液与孵育后上清中目的蛋白相比,上清中含量要低不少,说明目的蛋白被沉淀下来了,那为什么洗脱液曝不出目的条带?目的条带位置以下的黄色部分又是什么?它为什么会变黄且曝出空洞的结果?求大神们帮帮忙分析分析!

CO-IP后WB条带发光液发光后,膜变黄色
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坚持不下去了就再坚持一下
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玄玄子

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 巩子汉 at 2017-08-08 22:59:10
1)出现你所谓的“空洞”,是因为发生了荧光猝灭现象,降低二抗浓度,减少曝光时间即可解决;2)黄色部分为曝光时氧化太过,原因如1),也可稀释显影液。

多谢了!诚然你说的很有道理,但是我认为这不是根本原因。确实出现黄色和空洞现象是氧化太过和淬灭造成,但是我的二抗浓度已经是1:8000/10000了,这是绝对不高的浓度了,我曝光的时间全在5秒以下...总之,我想说明的是这是我co-ip之后样品的问题。我想请问一下,CO-IP最后洗脱样品你是采用的什么方法?

发自小木虫IOS客户端
坚持不下去了就再坚持一下
4楼2017-08-09 00:52:14
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查看全部 5 个回答

那半句誓言

金虫 (正式写手)

之前普通wb也出现过这个问题 是因为蛋白量太多的原因 如果是轻链的话 建议降低孵育的IP抗议的量

发自小木虫IOS客户端
2楼2017-07-11 03:54:52
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巩子汉

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1)出现你所谓的“空洞”,是因为发生了荧光猝灭现象,降低二抗浓度,减少曝光时间即可解决;2)黄色部分为曝光时氧化太过,原因如1),也可稀释显影液。
3楼2017-08-08 22:59:10
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cwyhhzsy

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

5楼2018-09-06 15:34:21
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