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玄玄子

铁杆木虫 (正式写手)

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[求助] CO-IP后WB条带发光液发光后，膜变黄色已有1人参与

这张是CO-IP后做WB发光后的膜，图片从左到右，前两个箭头分别是原液和孵育后上清目的条带的位置，第三个箭头所指是洗脱液上样，发现此条带与目的条带相比要偏小，怀疑为抗体轻链，但比25kd位置要大（图中25kd位置为maker带最下一条）。我的问题主要是：1,、发光后为什么膜会变黄？这样造成了之后的曝光不出黑色条带，黄色部分曝光结果为“空洞‘’2、因为通过曝光前两条带的比较，发现原液与孵育后上清中目的蛋白相比，上清中含量要低不少，说明目的蛋白被沉淀下来了，那为什么洗脱液曝不出目的条带？目的条带位置以下的黄色部分又是什么？它为什么会变黄且曝出空洞的结果？求大神们帮帮忙分析分析！

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坚持不下去了就再坚持一下

1楼 2017-07-11 02:59:26

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玄玄子

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 巩子汉 at 2017-08-08 22:59:10
1）出现你所谓的“空洞”，是因为发生了荧光猝灭现象，降低二抗浓度，减少曝光时间即可解决；2)黄色部分为曝光时氧化太过，原因如1），也可稀释显影液。

多谢了！诚然你说的很有道理，但是我认为这不是根本原因。确实出现黄色和空洞现象是氧化太过和淬灭造成，但是我的二抗浓度已经是1:8000/10000了，这是绝对不高的浓度了，我曝光的时间全在5秒以下...总之，我想说明的是这是我co-ip之后样品的问题。我想请问一下，CO-IP最后洗脱样品你是采用的什么方法？

发自小木虫IOS客户端