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病理小白

新虫 (初入文坛)

[求助] 做pFGC-5941克隆出现的有趣现象 已有1人参与

使用约1500bp的片段替代pFGC5941的启动子后,双酶切正向插入一个750bp的片段A,然后另外两个酶切位点反向插入A,结果在kana板子上,长出两种大小的菌落,挑取菌落液体培养后,碱裂解法提取质粒,收集菌体时都看得到,加入溶液3后,小菌落的变得很浑浊,大菌落的很正常(絮状物,较为澄清)图1,在沉淀步骤时,小菌落看不到沉淀了,最后酶切检测,小菌落什么都没有,大菌落符合要求
      很怪啊,小菌落是什么呢?假如是卫星菌落的话,它也没有围绕在大菌落旁啊,数目及位置不符合呀  图2,请各位大神加以解释。

做pFGC-5941克隆出现的有趣现象


做pFGC-5941克隆出现的有趣现象-1


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YAXIDO腐朽

新虫 (小有名气)

我做kana板也偶尔会这样,真正抗的会一直长大,长不大的菌落都是不对的。

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2楼2018-02-05 20:44:00
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奶斯 lo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你是用这个载体做启动子吗?我和你做一样的,但我后面遇到一个问题,想请教一下你,启动子后面的基因可以用Nco1和Xbal1这两个酶切位点吗?还是要紧接着启动子。。。

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3楼2018-09-09 13:09:11
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