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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 做pFGC-5941克隆出现的有趣现象
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病理小白

新虫 (初入文坛)

[求助] 做pFGC-5941克隆出现的有趣现象 已有1人参与

使用约1500bp的片段替代pFGC5941的启动子后，双酶切正向插入一个750bp的片段A，然后另外两个酶切位点反向插入A，结果在kana板子上，长出两种大小的菌落，挑取菌落液体培养后，碱裂解法提取质粒，收集菌体时都看得到，加入溶液3后，小菌落的变得很浑浊，大菌落的很正常（絮状物，较为澄清）图1，在沉淀步骤时，小菌落看不到沉淀了，最后酶切检测，小菌落什么都没有，大菌落符合要求
      很怪啊，小菌落是什么呢？假如是卫星菌落的话，它也没有围绕在大菌落旁啊，数目及位置不符合呀  图2，请各位大神加以解释。

做pFGC-5941克隆出现的有趣现象


做pFGC-5941克隆出现的有趣现象-1


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1楼 2017-07-10 21:44:35
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YAXIDO腐朽

新虫 (小有名气)
我做kana板也偶尔会这样，真正抗的会一直长大，长不大的菌落都是不对的。

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2楼2018-02-05 20:44:00
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奶斯 lo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你是用这个载体做启动子吗？我和你做一样的，但我后面遇到一个问题，想请教一下你，启动子后面的基因可以用Nco1和Xbal1这两个酶切位点吗？还是要紧接着启动子。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2018-09-09 13:09:11
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