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SooSweet

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切质粒电泳反而比原质粒要快是为什么呀? 已有2人参与

用BbsⅠ酶切px330质粒,还同时加了CIP进行去磷酸化处理,然后电泳的时候发现酶切的质粒反而比原质粒要跑得快,而且差距还蛮明显的...重复过几次,都是一样的结果,很疑惑这是为什么呀?大家有遇到过相似的情况嘛?怎么处理的呢?怕解决不好会影响后续的连接转化质粒构建,不想好不容易构个质粒,在一开始的地方就出问题,求大神们指教啊,小妹不胜感激!!!
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、因为酶切后,原来环形的DNA被切成两条线性的,线性的要比环形跑的速度快。

2、酶切后质粒就成为线性的,迁移率就和分子量一致了,而未切的质粒可能有三种形态,超螺旋、环状和松弛态,其中环状的质粒在电泳过程中迁移最慢。
及时行乐,人生不留遗憾!
2楼2017-07-11 08:41:43
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SooSweet

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-11 08:41:43
1、因为酶切后,原来环形的DNA被切成两条线性的,线性的要比环形跑的速度快。

2、酶切后质粒就成为线性的,迁移率就和分子量一致了,而未切的质粒可能有三种形态,超螺旋、环状和松弛态,其中环状的质粒在电泳过 ...

但是我酶切掉的片段只有二十几bp,这切开的质粒和原质粒的差距只有这么一点,线性和环状,不应该还是环状的原质粒比较快嘛?
3楼2017-07-12 09:51:12
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晋鹏

版主 (知名作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by SooSweet at 2017-07-12 09:51:12
但是我酶切掉的片段只有二十几bp,这切开的质粒和原质粒的差距只有这么一点,线性和环状,不应该还是环状的原质粒比较快嘛?...

我推荐你 看相关研究的文献,或者分子生物学的书籍,GENE viii 上面有详细的解释,而不是“你认为”。
及时行乐,人生不留遗憾!
4楼2017-07-12 10:13:28
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donggb2012

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

https://wenku.baidu.com/view/17004ac7376baf1ffd4fadc9这里有一篇关于质粒电泳图的说明,你看了就应该知道为什么了。
学习,积累,进步
5楼2018-02-28 16:25:17
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