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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酶切质粒电泳反而比原质粒要快是为什么呀？
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SooSweet

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切质粒电泳反而比原质粒要快是为什么呀？ 已有2人参与

用BbsⅠ酶切px330质粒，还同时加了CIP进行去磷酸化处理，然后电泳的时候发现酶切的质粒反而比原质粒要跑得快，而且差距还蛮明显的...重复过几次，都是一样的结果，很疑惑这是为什么呀？大家有遇到过相似的情况嘛？怎么处理的呢？怕解决不好会影响后续的连接转化质粒构建，不想好不容易构个质粒，在一开始的地方就出问题，求大神们指教啊，小妹不胜感激！！！
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1楼 2017-07-09 15:52:19
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SooSweet

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-11 08:41:43
1、因为酶切后，原来环形的DNA被切成两条线性的，线性的要比环形跑的速度快。

2、酶切后质粒就成为线性的，迁移率就和分子量一致了，而未切的质粒可能有三种形态，超螺旋、环状和松弛态，其中环状的质粒在电泳过 ...

但是我酶切掉的片段只有二十几bp，这切开的质粒和原质粒的差距只有这么一点，线性和环状，不应该还是环状的原质粒比较快嘛？
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3楼2017-07-12 09:51:12
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、因为酶切后，原来环形的DNA被切成两条线性的，线性的要比环形跑的速度快。

2、酶切后质粒就成为线性的，迁移率就和分子量一致了，而未切的质粒可能有三种形态，超螺旋、环状和松弛态，其中环状的质粒在电泳过程中迁移最慢。
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及时行乐，人生不留遗憾！
2楼2017-07-11 08:41:43
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晋鹏

版主 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by SooSweet at 2017-07-12 09:51:12
但是我酶切掉的片段只有二十几bp，这切开的质粒和原质粒的差距只有这么一点，线性和环状，不应该还是环状的原质粒比较快嘛？...

我推荐你 看相关研究的文献，或者分子生物学的书籍，GENE viii 上面有详细的解释，而不是“你认为”。
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及时行乐，人生不留遗憾！
4楼2017-07-12 10:13:28
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donggb2012

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

https://wenku.baidu.com/view/17004ac7376baf1ffd4fadc9这里有一篇关于质粒电泳图的说明，你看了就应该知道为什么了。
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学习，积累，进步
5楼2018-02-28 16:25:17
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