| 查看: 3943 | 回复: 3 | ||
[求助]
RACE通用引物 已有1人参与
|
|
想请教一下race的3，5两个通用引物是怎么设的，可以拿别人的来用吗？设上下游引物要参考通用引物的Tm值吗？最近做race有点头疼 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有74人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
2楼2017-07-09 00:35:17
晋鹏
版主 (知名作家)
- MolEPI: 6
- 应助: 626 (博士)
- 贵宾: 0.096
- 金币: 27592.6
- 散金: 1052
- 红花: 288
- 沙发: 2
- 帖子: 5663
- 在线: 726.4小时
- 虫号: 1183978
- 注册: 2011-01-05
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
- 管辖: 农林
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
1、SMARTTM 3'-RACE的原理 利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作为一个引物结合位点,以连有SMART寡核营酸序列通用接头引物的Oligo（dT）30MN作为锁定引物反转录合成标准第一链cDNA.然后用一个基因特异引物GSP1（gene specific primer,GSP）作为上游引物,用一个含有部分接头序列的通用引物UPM（universal primer,UPM）作为下游引物,以cDNA第一链为模板,进行PCR循环,把目的基因3' 末端的DNA片段扩增出来. SMARTTM 5'-RACE的原理 先利用mRNA的3'末端的poly（A）尾巴作为一个引物结合位点,以Oligo（dT）30MN作为锁定引物在反转录酶MMLV作用下,反转录合成标准第一链cDNA.利用该反转录酶具有的末端转移酶活性,在反转录达到第一链的5'末端时自动加上3-5个（dC）残基,退火后（dC）残基与含有SMART寡核苷酸序列Oliogo（dG）通用接头引物配对后,转换为以SMART序列为模板继续延伸而连上通用接头（见Figure 2 ）.然后用一个含有部分接头序列的通用引物UPM（universal primer,UPM）作为上游引物,用一个基因特异引物2（GSP 2 genespecific primer,GSP）作为下游引物,以SMART第一链cDNA为模板,进行PCR循环,把目的基因5'末端的cDNA片段扩增出来.最终,从2个有相互重叠序列的3'/ 5'-RACE产物中获得全长cDNA,或者通过分析RACE产物的3'和5'端序列,合成相应引物扩增出全长cDNA. 2、UPM,NUP是两个通用引物。序列分别 Upm: CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT（长） CTAATACGAC TCACTATAGGGC（短） NUP 5’-AAGCAGTGGT AACAACGCAGAGT-3’ |
3楼2017-07-11 08:44:52
4楼2017-09-14 20:07:22
50