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心若向阳,无畏悲

新虫 (初入文坛)

[交流] T载体老连不上 已有3人参与

,目的片段胶回收,浓度20多,但T载体老连不上怎么办?

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kangaroo0513

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
包给我,直接给你克隆到你的载体里去,还用喵T载体啊。。
2楼2017-07-04 21:49:44
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晋鹏

版主 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你这个属于连接效率偏低。建议从以下方面改善:
1. 为了提高加“A”反应效率,用于加“A”反应的末端平滑 DNA 片段应进行切胶回收的纯化处 理, 尽量避免引物等其它杂质的存在。 切胶回收时可使用 Takara 凝胶回收试剂盒 (Code No. 9762) 。
2. 请使用转化效率大于 10 cfu/μ g pUC19 DNA 的感受态细胞。
3. DNA 片段的立体结构、DNA 片段的长短都会影响克隆效率。一般情况下,大片段 DNA 的克隆效 率(连接效率与转化效率)偏低,此时可以延长连接反应时间,或采用电转化方法。
4. 进行切胶回收纯化 DNA 片段时,不要使 DNA 片段在紫外线下暴露时间过长。
5. Solution I 应尽量避免反复冻融。
6. 建议使用新配制的平板培养基。
及时行乐,人生不留遗憾!
3楼2017-07-05 17:09:52
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hzlatqh

银虫 (小有名气)

两个黄鹂鸣翠柳,一行白鹭上青天
4楼2017-07-06 06:30:12
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