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T载体老连不上 已有3人参与
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，目的片段胶回收，浓度20多，但T载体老连不上怎么办？ 发自小木虫Android客户端 |
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kangaroo0513
新虫 (正式写手)
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2楼2017-07-04 21:49:44
晋鹏
版主 (知名作家)
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- 专业: 生物信息学
- 管辖: 农林
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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你这个属于连接效率偏低。建议从以下方面改善： 1. 为了提高加“A”反应效率，用于加“A”反应的末端平滑 DNA 片段应进行切胶回收的纯化处 理， 尽量避免引物等其它杂质的存在。 切胶回收时可使用 Takara 凝胶回收试剂盒 （Code No. 9762） 。 2. 请使用转化效率大于 10 cfu/μ g pUC19 DNA 的感受态细胞。 3. DNA 片段的立体结构、DNA 片段的长短都会影响克隆效率。一般情况下，大片段 DNA 的克隆效 率（连接效率与转化效率）偏低，此时可以延长连接反应时间，或采用电转化方法。 4. 进行切胶回收纯化 DNA 片段时，不要使 DNA 片段在紫外线下暴露时间过长。 5. Solution I 应尽量避免反复冻融。 6. 建议使用新配制的平板培养基。 |
3楼2017-07-05 17:09:52
4楼2017-07-06 06:30:12