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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助：定量PCR结果无CT值
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贱贱JMe

木虫 (小有名气)

教导主任
引用回帖:
7楼: Originally posted by qiaoqiao1223 at 2017-07-05 07:23:06
做标准曲线的，好像不用内参吧。。我们没设内参。等明天再换个标准样品，增加循环次数再试一下~...

噢，那你的目的岂不是就是检测样品中某成分的量，CT值不理想不就是含量很低呗。希望能帮到你
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想做一位科研好人
11楼2017-07-05 08:06:47
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Sophie0124

新虫 (著名写手)
祝好

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12楼2017-07-05 08:15:21
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qiaoqiao1223

新虫 (小有名气)
附上第一次和第二次的曲线图。
第一次不知道什么情况。。用的是自己扩增的质粒做标准样品 A。循环35个
第二次用了两种标准样品，一个是别人给的B，一个是第一次用的A。（A就是B的扩增产物）循环40个。

我质粒扩增的是不是也有问题啊。。当时A测的浓度是1000多，B的浓度只有200多。
求助：定量PCR结果无CT值
第一次溶解曲线


求助：定量PCR结果无CT值-1
第二次溶解曲线


求助：定量PCR结果无CT值-2
第一次结果


求助：定量PCR结果无CT值-3
第二次结果
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13楼2017-07-06 12:56:03
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qiaoqiao1223

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 许彦 at 2017-07-04 11:21:23
样本浓度吧，你有具体的实验扩增曲线图吗

刚刚传了一下两次的图~麻烦帮忙看下。。另外，我想问下，荧光定量PCR的模板可以是质粒么？ 之前做的都是提取RNA，反转录成cDNA做模板的。但是质粒是环状双链DNA，这个需不需要线性化？
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14楼2017-07-06 13:21:33
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qiaoqiao1223

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yucuiyuan00 at 2017-07-04 09:03:08
一般荧光定量PCR Ct值30多，说明模板浓度比较低，需要提高模板浓度。PCR结束有扩增曲线的话再跑胶确认下片段大小。循环数可以增加到40。

刚刚又做了一次定量。只有几个样品有CT值。用PCR产物跑了个胶，一个条带都没有。。
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15楼2017-07-06 13:25:38
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qiaoqiao1223

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stabilized at 2017-07-04 08:46:14
最好先用PCR试试条件，跑电泳确认能P出条带

定量PCR的结果只有三组有CT直，但是用这个产物跑了胶，没有条带。。
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16楼2017-07-06 13:26:50
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yucuiyuan00

金虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by qiaoqiao1223 at 2017-07-06 13:25:38
刚刚又做了一次定量。只有几个样品有CT值。用PCR产物跑了个胶，一个条带都没有。。...

不知道楼主PCR时，质粒的浓度？一般，PCR模板为提取基因组时，浓度范围10-100ng/uL；PCR模板为PCR产物或质粒时，浓度范围1-10pg/uL。
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保持平常心❤
17楼2017-07-07 17:12:53
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许彦

木虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by qiaoqiao1223 at 2017-07-06 13:21:33
刚刚传了一下两次的图~麻烦帮忙看下。。另外，我想问下，荧光定量PCR的模板可以是质粒么？ 之前做的都是提取RNA，反转录成cDNA做模板的。但是质粒是环状双链DNA，这个需不需要线性化？...

看了，基本就没有扩增，模板可以是质粒的。

发自小木虫IOS客户端
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18楼2017-07-08 05:46:40
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