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落日余晖34木虫 (正式写手)
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crispr ptarget-grna质粒构建 已有3人参与
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在构建这个pTarget-grna时，我看文献上说采用含grna的引物反pTargetF质粒后会产生一个缺口，修复这个缺口需要转入DH5α中，修复完成的的ptargetF-grna，构建完成是直接跑胶与ptargetF进行对比，可是就算是构建完成，也就多了20bp的样子，这个跑胶应该是分辨不出来的吧？还是说应该送去测序看一下？另外反p的时候引物应该用保真性高的聚合酶吧？ 注:采用的系统是双质粒系统，在大肠中进行敲除。 有比较了解的小伙伴吗？ 发自小木虫Android客户端 |
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我没有加酶切位点，是想通过两条引物上加的互补序列搭在一起成环的。那你的引物具体是酶切位点-与目标序列互补的N20-gRNA这样的设计吗？ 发自小木虫IOS客户端 |
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