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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » linker加6*his的测序问题，有人遇见过吗？
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petviolin

铜虫 (初入文坛)

[求助] linker加6*his的测序问题，有人遇见过吗？ 已有1人参与

大家好！因考虑在研究的蛋白上连上6*his，就在his前加上了GGGGS作为linker，设计的大致结构为目的蛋白-linker-6*his，然后真核表达。linker-6*his合成的碱基序列为GGTGGTGGTGGTAGC（或TCA）CACCACCACCACCATCAC，试验中出现了奇怪的现象：pcr扩增后连克隆载体pEASY,测序到上面linker-6*his时就无法通过，上游引物到这个地方测不通，下游引物直接测序失败，是因为gc含量高吗？但看上面顶多百分之七十；还是因为形成了二级结构？现在有些担心到时候会不会不能表达，希望得到大家的帮助，谢谢！
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1楼 2017-06-24 14:33:45
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查无此人lyp

新虫 (正式写手)
你是设计引物pcr弄出来的这段序列还是和基因一起直接合成的？

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2楼2018-02-03 20:58:32
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

GGT和CCA形成二级结构，有的测序可以专门针对这种情况测序，你试一下。
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
3楼2018-02-04 06:44:42
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