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Trizol 法提取线虫RNA 已有2人参与
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最近一直用Trizol法提取线虫RNA，这个方法好像是从提植物的RNA改进的，提了几十次，要么就是什么也提不出来，要么就是降解了，请教一下这是什么方面的错误，方法上有不对的地方吗？ 发自小木虫Android客户端 |
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【答案】应助回帖
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Trizol试剂盒提取。先收集L4时期的线虫，一般2000条到1.5ml EP管中加500ul trizol匀浆（研磨）2min，研磨后再加500 ul trizol ,RT孵育30min，加200 ul氯仿，vortex 15s，RT孵育15min，4℃离心（12000g/15min）.转移上层液相至新的1.5 ml EP管（不要吸到中间相），加500 ul 100%异丙醇，RT孵育10min ，RT离心（12000g/15min）,移走上层液体，加1ml 75%的酒精清洗，上下颠倒几次即可，RT离心（7500g/5min），吸走酒精，空气中干燥。加15 ul ddH2O溶解。 整个过程中要注意RNA酶的污染。 |
16楼2018-10-26 17:27:55
stabilized
银虫 (小有名气)
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- 红花: 10
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2楼2017-06-23 16:10:26
原来，是这样
金虫 (小有名气)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-23 23:22:48
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-23 23:22:48
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室温放置RNA晾干。。。这绝对会出问题啊，把EP管放到超净工作台里面吹一会，等到RNA快干（不能完全干，不然不好溶于DEPC水）再加DEPC水，有条件还可以加一点RNase抑制剂进去。跑胶的时候电泳相关试剂全部换新鲜的，不然很容易降解。实验中各种操作都要在冰上进行更好。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-06-23 17:06:58
4楼2017-06-23 22:28:42