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周易

新虫 (初入文坛)

[求助] Trizol 法提取线虫RNA 已有2人参与

最近一直用Trizol法提取线虫RNA,这个方法好像是从提植物的RNA改进的,提了几十次,要么就是什么也提不出来,要么就是降解了,请教一下这是什么方面的错误,方法上有不对的地方吗?

Trizol 法提取线虫RNA


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原来,是这样

金虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-23 23:22:48
室温放置RNA晾干。。。这绝对会出问题啊,把EP管放到超净工作台里面吹一会,等到RNA快干(不能完全干,不然不好溶于DEPC水)再加DEPC水,有条件还可以加一点RNase抑制剂进去。跑胶的时候电泳相关试剂全部换新鲜的,不然很容易降解。实验中各种操作都要在冰上进行更好。

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3楼2017-06-23 17:06:58
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原来,是这样

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by 周易 at 2017-06-23 22:28:42
谢谢你,请问,第三步加氯仿,是在离心后加还是在离心前加?③④步的位置需要换一下吗?
...

没错的,这就是经典的方法。

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5楼2017-06-23 23:27:19
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stabilized

银虫 (小有名气)

改用试剂盒吧,会省去很多时间。
坚持!
2楼2017-06-23 16:10:26
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普通回帖

周易

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 原来,是这样 at 2017-06-23 17:06:58
室温放置RNA晾干。。。这绝对会出问题啊,把EP管放到超净工作台里面吹一会,等到RNA快干(不能完全干,不然不好溶于DEPC水)再加DEPC水,有条件还可以加一点RNase抑制剂进去。跑胶的时候电泳相关试剂全部换新鲜的, ...

谢谢你,请问,第三步加氯仿,是在离心后加还是在离心前加?③④步的位置需要换一下吗?

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4楼2017-06-23 22:28:42
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yedansky

新虫 (著名写手)

一直想问为什么大家都在研究线虫?

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6楼2017-06-24 08:45:58
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yedansky

新虫 (著名写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-24 23:22:12
所有的玻璃试剂瓶都要高温高压过的,EP管要用depc水泡过,液氮研磨的菌体量不宜超过100mg,氯仿离心后吸上清不要贪多,还有75%的乙醇也要depc水来配置

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7楼2017-06-24 08:50:30
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周易

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yedansky at 2017-06-24 08:50:30
所有的玻璃试剂瓶都要高温高压过的,EP管要用depc水泡过,液氮研磨的菌体量不宜超过100mg,氯仿离心后吸上清不要贪多,还有75%的乙醇也要depc水来配置

EP管用的是无酶的,研磨的时候没有把液氮回到样品里,是把离心管放到磨人的液氮里泡一会之后拿出来研磨,再泡再研。

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8楼2017-06-24 13:20:12
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yedansky

新虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 周易 at 2017-06-24 13:20:12
EP管用的是无酶的,研磨的时候没有把液氮回到样品里,是把离心管放到磨人的液氮里泡一会之后拿出来研磨,再泡再研。
...

噢,我直接用高压过的研钵研磨的,研磨三次,后来效果还不错

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9楼2017-06-24 19:45:24
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周易

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by yedansky at 2017-06-24 19:45:24
噢,我直接用高压过的研钵研磨的,研磨三次,后来效果还不错
...

你研磨的也是线虫吗?

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10楼2017-06-24 21:50:25
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