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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » Trizol 法提取线虫RNA
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周易

新虫 (初入文坛)

[求助] Trizol 法提取线虫RNA 已有2人参与

最近一直用Trizol法提取线虫RNA，这个方法好像是从提植物的RNA改进的，提了几十次，要么就是什么也提不出来，要么就是降解了，请教一下这是什么方面的错误，方法上有不对的地方吗？

Trizol 法提取线虫RNA


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1楼 2017-06-23 10:48:44
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

原来，是这样

金虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-23 23:22:48
室温放置RNA晾干。。。这绝对会出问题啊，把EP管放到超净工作台里面吹一会，等到RNA快干（不能完全干，不然不好溶于DEPC水）再加DEPC水，有条件还可以加一点RNase抑制剂进去。跑胶的时候电泳相关试剂全部换新鲜的，不然很容易降解。实验中各种操作都要在冰上进行更好。

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3楼2017-06-23 17:06:58
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原来，是这样

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by 周易 at 2017-06-23 22:28:42
谢谢你，请问，第三步加氯仿，是在离心后加还是在离心前加？③④步的位置需要换一下吗？
...

没错的，这就是经典的方法。

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5楼2017-06-23 23:27:19
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stabilized

银虫 (小有名气)
改用试剂盒吧，会省去很多时间。
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坚持！
2楼2017-06-23 16:10:26
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周易

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 原来，是这样 at 2017-06-23 17:06:58
室温放置RNA晾干。。。这绝对会出问题啊，把EP管放到超净工作台里面吹一会，等到RNA快干（不能完全干，不然不好溶于DEPC水）再加DEPC水，有条件还可以加一点RNase抑制剂进去。跑胶的时候电泳相关试剂全部换新鲜的， ...

谢谢你，请问，第三步加氯仿，是在离心后加还是在离心前加？③④步的位置需要换一下吗？

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4楼2017-06-23 22:28:42
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yedansky

新虫 (著名写手)
一直想问为什么大家都在研究线虫？

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6楼2017-06-24 08:45:58
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yedansky

新虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-24 23:22:12
所有的玻璃试剂瓶都要高温高压过的，EP管要用depc水泡过，液氮研磨的菌体量不宜超过100mg，氯仿离心后吸上清不要贪多，还有75%的乙醇也要depc水来配置

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7楼2017-06-24 08:50:30
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周易

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yedansky at 2017-06-24 08:50:30
所有的玻璃试剂瓶都要高温高压过的，EP管要用depc水泡过，液氮研磨的菌体量不宜超过100mg，氯仿离心后吸上清不要贪多，还有75%的乙醇也要depc水来配置

EP管用的是无酶的，研磨的时候没有把液氮回到样品里，是把离心管放到磨人的液氮里泡一会之后拿出来研磨，再泡再研。

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8楼2017-06-24 13:20:12
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yedansky

新虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 周易 at 2017-06-24 13:20:12
EP管用的是无酶的，研磨的时候没有把液氮回到样品里，是把离心管放到磨人的液氮里泡一会之后拿出来研磨，再泡再研。
...

噢，我直接用高压过的研钵研磨的，研磨三次，后来效果还不错

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9楼2017-06-24 19:45:24
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周易

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yedansky at 2017-06-24 19:45:24
噢，我直接用高压过的研钵研磨的，研磨三次，后来效果还不错
...

你研磨的也是线虫吗？

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10楼2017-06-24 21:50:25
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