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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为什么启动子一直克隆不出来呢？
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欢欢啦

铁虫 (正式写手)

[求助] 为什么启动子一直克隆不出来呢？ 已有1人参与

之前换了很多对引物，好不容易找到了目标条带，然后加ATTB引物克隆就扩不出来了，该怎么办呢？求各位大神帮忙？

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1楼 2017-06-22 20:50:20
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六维空想

新虫 (小有名气)
你用的什么做模板

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欢欢啦
2楼2017-06-22 21:32:15
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伤何处

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
好不容易找到目的条带 的意思是终于扩出来了然后连到T载体上了么？
一般我们都是先把启动子扩出来，连到克隆载体上，然后送去测序确定序列，然后摇菌提质粒。然后再用带attB接头的引物以质粒为模板扩增。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

欢欢啦
对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
3楼2017-06-23 00:26:22
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欢欢啦

铁虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 六维空想 at 2017-06-22 21:32:15
你用的什么做模板

PCR产物

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4楼2017-06-25 13:03:53
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欢欢啦

铁虫 (正式写手)
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引用回帖:
3楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-06-23 00:26:22
好不容易找到目的条带 的意思是终于扩出来了然后连到T载体上了么？
一般我们都是先把启动子扩出来，连到克隆载体上，然后送去测序确定序列，然后摇菌提质粒。然后再用带attB接头的引物以质粒为模板扩增。

没有连接到T载体上，就是用第一次扩出来的启动子为模版，用attb引物扩增。打算做完胶回收再拿去测序。

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5楼2017-06-25 13:07:51
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