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sqizeng

金虫 (正式写手)

[求助] caco-2细胞transwell问题 已有1人参与

本人是化学出身,刚接触细胞实验,想在论坛里咨询各位大侠一些transwell的问题。
细胞密度:2*10的5次方,上室0.5ml,下室1.5ml
培养条件:DMEM,20%FBS,1%非必需氨基酸,1%ps
问题:1: 之前做过两次,在种板一个星期到10天后测电阻,只有120左右,这一次第三天,也是差不多这个电阻值,不知道为什么?下年两张图是三天后拍摄的transwell的细胞图
2: 每天换液的时候发现上室的培养基颜色会由红色变为浅黄色,下室变为浅红色,难道是细胞长得太快了吗?细胞培养的时候,复苏第二代的细胞1传4,第二天就基本长满了(80-90%)。
请各位多指导指导。

caco-2细胞transwell问题


caco-2细胞transwell问题-1


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sqizeng

金虫 (正式写手)

别沉啊,自己顶起来,各位有经验的前辈多给点意见啊……

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2楼2017-06-19 20:18:41
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632494587ZYj

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sqizeng: 金币+5, 有帮助 2017-06-21 12:46:15
我前段时间也在做Cacao-2的Transwell模型,电阻120应该只能算是本底值了,细胞没有长成单层,或者因为你细胞生长过快,长满后出现空泡化了也会导致阻值上不去。我之前做的在12天左右阻值就达到1000Ω左右了。建议你可以优化一下细胞密度,还有血清是否降低一点更好?10%?
pS: 我想请问一下你这个细胞的图是怎么拍的?你们用的那个公司的Transwell板?用倒置显微镜拍的吗?我之前尝试过,但是在镜下看不到,请问你是怎么看到的?

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2017-06-21 09:17:32
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sqizeng

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 632494587ZYj at 2017-06-21 09:17:32
我前段时间也在做Cacao-2的Transwell模型,电阻120应该只能算是本底值了,细胞没有长成单层,或者因为你细胞生长过快,长满后出现空泡化了也会导致阻值上不去。我之前做的在12天左右阻值就达到1000Ω左右了。建议你 ...

我也是觉得细胞长得太快了,本来这个细胞按理来说是比较慢的,我之前也用过2万个细胞去铺板,但是也没有成功,不知道你当时铺板没孔细胞数是多少?按理说长得快不是更容易分泌紧密连接吗?你用的也是10%的FBS吗?
ps:照片我是直接在显微镜下用手机拍的。

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4楼2017-06-21 12:26:57
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jjju6

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by sqizeng at 2017-06-18 23:05:30
本人是化学出身,刚接触细胞实验,想在论坛里咨询各位大侠一些transwell的问题。
细胞密度:2*10的5次方,上室0.5ml,下室1.5ml
培养条件:DMEM,20%FBS,1%非必需氨基酸,1%ps
问题:1: 之前做过两次,在种板一个星 ...

如果做caco2转运实验的话,transwell的孔径需要原则多大的呢

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5楼2017-09-13 01:04:40
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相约在科大

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 632494587ZYj at 2017-06-21 09:17:32
我前段时间也在做Cacao-2的Transwell模型,电阻120应该只能算是本底值了,细胞没有长成单层,或者因为你细胞生长过快,长满后出现空泡化了也会导致阻值上不去。我之前做的在12天左右阻值就达到1000Ω左右了。建议你 ...

你好,我也正在做这个,两次电阻都上不去,失败了,想请教你,你种的细胞密度是多少?操作过程中都有什么需要注意的,非常期待你的回答,非常感谢,现在模型就是建不成

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6楼2017-09-30 00:29:27
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芦苇芊芊辞

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 632494587ZYj at 2017-06-21 09:17:32
我前段时间也在做Cacao-2的Transwell模型,电阻120应该只能算是本底值了,细胞没有长成单层,或者因为你细胞生长过快,长满后出现空泡化了也会导致阻值上不去。我之前做的在12天左右阻值就达到1000Ω左右了。建议你 ...

你好,请教一下,我用密理博24孔transwell(孔径0.4μm),TEER一直上不去,可能是没有形成致密单层细胞,可是我在显微镜下无法观察到上层细胞,不能确定细胞的生长状态。既然镜下看不到,请问你后来是通过什么方法看上层细胞的?
7楼2017-11-06 14:50:35
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芦苇芊芊辞

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sqizeng at 2017-06-21 12:26:57
我也是觉得细胞长得太快了,本来这个细胞按理来说是比较慢的,我之前也用过2万个细胞去铺板,但是也没有成功,不知道你当时铺板没孔细胞数是多少?按理说长得快不是更容易分泌紧密连接吗?你用的也是10%的FBS吗?
...

请问楼主,你的transwell孔径是多大的?什么品牌?我用密理博24孔transwell(孔径0.4μm),在镜下根本看不到你这种细胞层。
8楼2017-11-06 14:54:26
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相约在科大

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 632494587ZYj at 2017-06-21 09:17:32
我前段时间也在做Cacao-2的Transwell模型,电阻120应该只能算是本底值了,细胞没有长成单层,或者因为你细胞生长过快,长满后出现空泡化了也会导致阻值上不去。我之前做的在12天左右阻值就达到1000Ω左右了。建议你 ...

想请教个问题,细胞产生空泡是什么原因

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9楼2017-12-18 23:43:12
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