应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 大片段DNA酶切连接效率怎么提高
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 3990  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zhenliu1991

新虫 (初入文坛)

[求助] 大片段DNA酶切连接效率怎么提高 已有2人参与

求助！！！构建文库时，单酶切的基因组DNA，用T4连接酶连接时，小片段DNA（<50Kb）连接效率很高，每2ul连接产物可达到5000个以上的单克隆，但是大片段DNA（~80Kb）连接效率很低，每2ul连接产物只有到600左右的单克隆，都进行了脱盐处理，也尝试了目的片段与载体的多种比例，都不能达到高效率，为什么？怎么提高大片段的连接效率？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-06-16 17:54:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mayunhui

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可以换载体试试，一般大片段的克隆都是比较难做的，条件允许的话，大片段的文库还是交给专业公司做会比较划算。
赞一下 回复此楼
书到用时方恨少
5楼2017-06-27 15:11:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

yufeiwaner

新虫 (小有名气)
楼主的问题解决了么？我也准备做文库，看资料，没有像楼主这么溜的做大片段。。。很多文献就连载3-10kb大小的片段。也不太理解做大片段的目的是什么呢？
赞一下 回复此楼
2楼2017-06-22 14:32:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大雄-静宜

新虫 (初入文坛)
试试用噬菌体包装吧

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2017-06-22 21:52:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mayunhui

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by yufeiwaner at 2017-06-22 14:32:41
楼主的问题解决了么？我也准备做文库，看资料，没有像楼主这么溜的做大片段。。。很多文献就连载3-10kb大小的片段。也不太理解做大片段的目的是什么呢？

真核生物的一个完整的基因都比较大，如果是研究基因簇的话，就更需要大片段。如果目标序列含有较长的重复序列时，也需要大片段。构建物理图谱时也需要大片段。
赞一下 回复此楼
书到用时方恨少
4楼2017-06-27 15:09:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 各位老师好，我的一志愿为北京科技大学085601材料专硕 +11 Koxui 2026-03-28 11/550 2026-03-31 21:17 by yuq
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +11 柳溪边 2026-03-26 12/600 2026-03-31 19:53 by Dyhoer
[论文投稿] chinese chemical letters英文版投稿求助 130+4 Yishengeryi 2026-03-30 4/200 2026-03-31 19:52 by babero
[考研] 318求调剂 +10 陈晨79 2026-03-30 10/500 2026-03-31 17:37 by 544594351
[考研] 285求调剂 +6 AZMK 2026-03-30 11/550 2026-03-31 17:33 by AZMK
[考研] 考研调剂求助 +7 13287130938 2026-03-31 7/350 2026-03-31 16:39 by 690616278
[考研] 一志愿085600中科院宁波所276分求调剂 +12 材料学257求调剂 2026-03-28 13/650 2026-03-31 14:30 by 六翼TMR
[考研] 求调剂 +4 图鉴212 2026-03-30 4/200 2026-03-31 10:20 by cal0306
[考研] 抱歉 +4 田洪有 2026-03-30 4/200 2026-03-30 21:26 by mumin1990
[考研] 一志愿华中师范化学332分求调剂 +3 Lyy930824@ 2026-03-29 3/150 2026-03-30 20:15 by DHUSHUAI
[考研] 0703一志愿9，初试成绩：338，四六级已过，有科研经历，求调剂！ +7 Zuhui0306 2026-03-25 7/350 2026-03-30 19:01 by 源_2020
[考研] 328求调剂 +8 嗯滴的基本都 2026-03-27 8/400 2026-03-30 17:20 by Wang200018
[考研] 085701求调剂初试286分 +5 secret0328 2026-03-28 5/250 2026-03-30 12:54 by fangnagu
[考研] 生物技术与工程 +7 1294608413 2026-03-25 8/400 2026-03-30 11:36 by 唐沐儿
[考研] 299求调剂 +10 15188958825 2026-03-25 10/500 2026-03-29 17:51 by 王亮_大连医科大
[考研] 321求调剂 +7 璞玉~~ 2026-03-25 8/400 2026-03-29 06:41 by 544594351
[硕博家园] 招收生物学/细胞生物学调剂 +4 IceGuo 2026-03-26 5/250 2026-03-29 01:25 by griffith2014
[考研] 打过很多竞赛，085406控制工程300分，求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭