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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 金属生物材料 » 【求助】30金币求助：bFGF如何定量检测
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shijiawei2008

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】30金币求助：bFGF如何定量检测

我做了一种胶原基双层材料，材料中间复合了肝素结合的bFGF（购于PEPRO TECH 公司）。通过对胶原材料的降解，收集降解释放液，检测释放液中的bFGF含量。我尝试过用ELISA 试剂盒检测释放液，样品和直接结合了肝素的bFGF都检测不到bFGF含量。现在我查文献，有人用碘同位素标记bFGF，然后用Beckman Coulter公司的 β counter (LS 1800) 对其进行检测。老板让我查一下关于液质联用仪检测生长因子的资料。刚刚接触这些，想请做过这两种检测的高手给一些方法上的指导。另外，小弟在天津上学，不知道这里什么地方可以做这两种方法的检测。如果您做过类似的试验，欢迎邮件联系：shijiawei2001@sina.com

[ Last edited by yusen_1982 on 2009-1-15 at 11:50 ]
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我是一个实用主义者，不念博士了，争取硕士毕业之后可以学以致用
1楼 2009-01-15 11:47:02
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111wwww

铁杆木虫 (知名作家)
帮你顶下
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2楼2009-01-15 11:49:18
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travelerchem

至尊木虫 (知名作家)
★ ★
yusen_1982(金币+1,VIP+0):谢谢应助
shijiawei2008(金币+1,VIP+0):比较有帮助
可以考虑找bFGF的抗体，上荧光标记的二抗，但是不能准确定量
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3楼2009-01-15 15:27:52
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dj04164

木虫 (正式写手)
★
zhangwj(金币+1,VIP+0):谢谢应助！
bFGF 是个蛋白吧，不知道lz是怎么处理的？蛋白很容易分解，要么失活，是不是处理过程中已经。。。。液质联用和液相，我们原来都是做小分子的，（要买标样）检测蛋白还没有用过这个，楼上的意见是用western，是个好办法，可以半定量。
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4楼2009-01-15 19:56:53
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wesley05
5楼2009-01-15 21:27:25
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lfscu

木虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
zhangwj(金币+2,VIP+0):谢谢参与！
shijiawei2008(金币+2,VIP+0):可以参考lfscu的建议
据我所了解，ELISA方法应该是检测bFGF中最常用的方法，ELISA应该算灵敏度较高的，建议换一个公司的试剂盒试试，碘标记好像也可以，不过我在文献中见的好像不多，至于液质联用估计有困难，首先通过液相色谱分离后检测一般是紫外，但bFGF紫外吸收较弱，灵敏度较差。
另外有可能是bFGF本身的问题
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6楼2009-01-15 22:04:57
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shijiawei2008

金虫 (小有名气)

回复3楼的

3楼的同学，能否介绍一下，您以前用WESTERN 是怎样半定量分析生长因子的呢？关于生长因子失活的问题，我也考虑过。样品在溶解前是保存在-20度冰箱里面的。使用前先配置成母液，取出一部分稀释后使用，母液再放在-20度保存。稀释液保存在-4度。各位看看，我的保存方法是否有问题呢？
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7楼2009-01-16 10:45:32
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travelerchem

至尊木虫 (知名作家)
★
shijiawei2008(金币+1):谢谢支持 1-18 16:34
Western Blot主要是看曝光灰度，测试样品蛋白量的。我提的方法其实不算Western，主要观测二抗的荧光强度来定性而已。
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8楼2009-01-16 22:55:20
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shijiawei2008

金虫 (小有名气)

to travelerchem ：

您所说的westernblot检测bFGF二抗的办法，能再具体些么？听您说的，我很受启发啊：）
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我是一个实用主义者，不念博士了，争取硕士毕业之后可以学以致用
9楼2009-01-18 16:36:55
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travelerchem

至尊木虫 (知名作家)
★ ★
zhangwj(金币+2):谢谢应助！ 1-18 23:57
你要是想做ELISA，可以买这个产品。

Quankine Immunoassay kit according to the manufacture’s instruction (Human bFGF Quankine ELISA kit, R & D Systems, Minneapolis, MN, USA)
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10楼2009-01-18 23:55:05
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