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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 金属生物材料 » 【求助】30金币求助：bFGF如何定量检测
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xhyu2936

金虫 (初入文坛)
★ ★
yusen_1982(金币+1):谢谢应助 1-19 09:03
shijiawei2008(金币+1):thank u for ur suggestion.But could u tell me how heparin interrupt ELISA during this process? 1-19 15:07
try to use heparinase release bFGF from heparin then do ELISA.
You can definitely try isotope, just painful choice.
Good luck!
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11楼2009-01-19 04:48:41
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yinmin9521

铁杆木虫 (著名写手)
可不可以在释放液里加入保护剂防止降解或失活？
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12楼2009-01-21 11:18:17
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liubin

专家顾问 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
shijiawei2008(金币+4):感谢提出建设性意见的前辈 1-25 09:45
zhangwj(金币+4):谢谢应助！过年快乐！ 1-25 10:23
首先，对于生长因子类物质（包括bfgf）的含量检测ELISA法是目前精度最高的检测方法。因为ELISA法的实质是抗原抗体反应。目前的各种仪器检测都无法达到ELISA法的精度。
对于你所面临的“样品和直接结合了肝素的bFGF都检测不到bFGF含量”的问题只有如下可能：
1. 样品有问题。这可能是样品本省的质量问题、运输中样品失活、保存方法不当失活。
2. ELISA试剂盒有问题。
3.你的操作方法（主要是工作条件）有问题。
4. 你的仪器有问题。
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13楼2009-01-25 01:13:29
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shijiawei2008

金虫 (小有名气)

to liubin

★ ★
zhangwj(金币+2):过年快乐！ 1-25 10:24
感谢您的回答。最近我问了一下试剂公司，那边的经理说不同的人重组bFGF，其分子量不同，作为抗原，与Elisa试剂盒中的抗体的结合位点也可能是不同的。我查了一下某家公司的bFGF的分子量，果然有很大区别，有17.6kD，17.8kD，18kD等一系列。自己分析，我前面的试验结果很可能是由于抗原与抗体的不匹配造成的。现在改用放射免疫分析法来测定碘同位素标记的bFGF浓度。有做过这种标记试验的前辈可否告诉我一些注意事项，毕竟是有放射性的物质啊。
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我是一个实用主义者，不念博士了，争取硕士毕业之后可以学以致用
14楼2009-01-25 09:42:43
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beckham277

木虫 (职业作家)
★ ★
sunbuct(金币+2):欢迎交流！ 2-2 13:49
我们这用的是双抗夹心的方法 也就是酶联免疫反应
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15楼2009-02-02 13:15:15
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ymj002

木虫 (小有名气)
★ ★
zhangwj(金币+2):谢谢参与讨论！ 2-3 09:35
放免分析已是即将被陶汰的技术，化学发光分析是今后一段时间的主流，不过楼主的难题可能主要是bFGF已变性，所以建议还是用Elisa方法检测，只要bFGF原料能用Elisa法检出就说明方法可行，要改变的只是楼主的生产工艺。
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16楼2009-02-03 09:10:28
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captainlei

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★
wgcui(金币+3,VIP+0):请在具体些。希望多多讨论！鼓励新虫！！！ 2-11 22:45
其实酶连免疫，ELISA，Western基本原理都是基于抗原抗体反应的
不知道你是用什么方法来降解你的胶原材料，可能在这个过程中使bFGF发生降解了
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17楼2009-02-11 20:36:16
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shijiawei2008

金虫 (小有名气)

我决定用放射性同位素标记法啦！

★
wgcui(金币+1,VIP+0):谢谢给出具体理由，欢迎总结后发这类的资源贴！！ 2-12 11:35
虽然有位仁兄说放免是过时的方法，但是这种方法还是有很高的灵敏度和定量检测的优势：1.放免标记物的半衰期长，我用的碘同位素可达6个月。2.标记的生长因子可能会失活，但本实验的目的是检测材料对生长因子的释放度，至于活性，不是考虑范围内的问题，后面我们还有检测材料释放的生长因子活性的试验。
所以我决定，放免标记是我最终选择的检测释放度方法。谢谢各位的关注！！！
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18楼2009-02-12 11:08:29
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wenquliu

★
薰衣草儿(金币+1,VIP+0):欢迎讨论~ 11-10 18:48
可能是bFGF失活了，导致你的测试结果不理想，我师兄就是用ELISA检测bFGF的释放的效果不错
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19楼2009-03-02 18:19:40
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shijiawei2008

金虫 (小有名气)
薰衣草儿(金币+0,VIP+0):可以的~ 11-10 18:47
斑竹，这个帖子放在这里快1年了，我的问题已经解决了。BB还没用完，可不可以还给我啊。
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20楼2009-11-10 14:29:20
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