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吴美儒

新虫 (小有名气)

[交流] RACE 已有6人参与

做5'RACE的时候第一轮扩增的时候扩出单一条带，目的条带大小约613，扩增第二轮的时候总是产生拖带的现象！请问是什么原因了？

RACE


RACE-1


RACE-2


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1楼 2017-06-09 22:39:32
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Huobol

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-10 23:28:08
引用回帖:
8楼: Originally posted by 一叶知秋365 at 2017-06-10 07:05:09
200倍不多，再稀释一下试试吧。我们以前稀释过1000或2000。
...

感觉够呛，看看楼主稀释更大倍数后能不能行，八成二轮引物不行，也许吧。
楼主，你第一轮条带单一，完全可以回收后连接克隆载体，送测序。不必非得做二轮PCR。看楼主一轮PCR挺不错的，就去链接T载体，送测序吧。
还有，可以用二轮的引物去做一轮PCR看看电泳条带如何，有带的话说明引物没啥问题，没有条带的话就是二轮的引物不成。

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吴美儒
让羽毛再飞一会儿
9楼2017-06-10 07:55:35
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一叶知秋365

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 吴美儒 at 2017-06-09 23:23:46
我将第一轮的产物稀释200倍后扩增第二轮的条带还是这样的
...

200倍不多，再稀释一下试试吧。我们以前稀释过1000或2000。

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吴美儒
8楼2017-06-10 07:05:09
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
顶，坐等高手

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2楼2017-06-09 23:00:21
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吴美儒

新虫 (小有名气)
我也坐等大神指导

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3楼2017-06-09 23:21:53
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王查查23

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2017-06-09 23:22:20
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王查查23

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5楼2017-06-09 23:22:36
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吴美儒

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 王查查23 at 2017-06-09 23:22:20
提高退火温度

还要提高？？？？已经到65℃了！

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6楼2017-06-09 23:23:00
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吴美儒

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王查查23 at 2017-06-09 23:22:36
模版的量少加点

我将第一轮的产物稀释200倍后扩增第二轮的条带还是这样的

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7楼2017-06-09 23:23:46
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王查查23

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
10楼2017-06-10 21:31:42
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