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求大神指导荧光定量中绝对定量灵敏度的问题 已有1人参与
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本人用的师姐的引物、引物都OK、体系也OK、换算的拷贝数也没问题、但是再高的灵敏度我实在做不下去了、我想请问一下、是否有引物不同做出来的灵敏度就不同这个说法、我目前只能做到9.95??10的3次方拷贝、目标片段150bp,用的18T载体、SYBR染料法做的、20ul 体系、文章中有做我这方面的人家PCR就可以灵敏度达到我这个级别、想想到最后我都做的啥啊、求大神指导、第二张图、上不去的溶解曲线分别是我的2次方拷贝和水、因为曲线上不去、所以这个值就没法要、其他的都还好、我的这个曲线都还可以、求指导啊   @biostar2009 发自小木虫IOS客户端 |
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3楼2017-06-09 15:01:23
sherlock0088
金虫 (小有名气)
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- 金币: 629.8
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-10 23:27:10
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-10 23:27:10
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一般来说不同的引物不同的扩增效率，上不去的原因是Ct太高，没到平台期扩增就结束了。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2017-06-09 08:19:02
4楼2017-06-09 15:23:30
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现在情况是这样的、我选取了6个点、去掉最高拷贝数两个点、得到的扩增效率勉强能行、但是我最低点对应的拷贝数9.95??10的3次方拷贝、我感觉我已经不是在做QPCR了、PCR都可以得到我的这个结果了、求大神指导 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2017-06-09 15:26:19