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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求大神指导荧光定量中绝对定量灵敏度的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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大头妞妞

新虫 (小有名气)

[求助] 求大神指导荧光定量中绝对定量灵敏度的问题 已有1人参与

本人用的师姐的引物、引物都OK、体系也OK、换算的拷贝数也没问题、但是再高的灵敏度我实在做不下去了、我想请问一下、是否有引物不同做出来的灵敏度就不同这个说法、我目前只能做到9.95??10的3次方拷贝、目标片段150bp,用的18T载体、SYBR染料法做的、20ul 体系、文章中有做我这方面的人家PCR就可以灵敏度达到我这个级别、想想到最后我都做的啥啊、求大神指导、第二张图、上不去的溶解曲线分别是我的2次方拷贝和水、因为曲线上不去、所以这个值就没法要、其他的都还好、我的这个曲线都还可以、求指导啊

求大神指导荧光定量中绝对定量灵敏度的问题


求大神指导荧光定量中绝对定量灵敏度的问题-1


求大神指导荧光定量中绝对定量灵敏度的问题-2


@biostar2009 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2017-06-08 22:26:42
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sherlock0088

金虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-10 23:27:10
一般来说不同的引物不同的扩增效率，上不去的原因是Ct太高，没到平台期扩增就结束了。

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2楼2017-06-09 08:19:02
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普通回帖

大头妞妞

新虫 (小有名气)
顶上去

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3楼2017-06-09 15:01:23
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大头妞妞

新虫 (小有名气)
求大神指导荧光定量中绝对定量灵敏度的问题-3

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4楼2017-06-09 15:23:30
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大头妞妞

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 大头妞妞 at 2017-06-09 15:23:30

现在情况是这样的、我选取了6个点、去掉最高拷贝数两个点、得到的扩增效率勉强能行、但是我最低点对应的拷贝数9.95??10的3次方拷贝、我感觉我已经不是在做QPCR了、PCR都可以得到我的这个结果了、求大神指导

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5楼2017-06-09 15:26:19
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矮腿妹的烦恼

新虫 (初入文坛)
最近也在做qPCR，想请教下跑完过后怎么分析？

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6楼2017-06-09 21:40:46
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贱贱JMe

木虫 (小有名气)

教导主任

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
6楼: Originally posted by 矮腿妹的烦恼 at 2017-06-09 21:40:46
最近也在做qPCR，想请教下跑完过后怎么分析？

你做的绝对定量还是相对定量，分析方法不一样
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想做一位科研好人
7楼2017-06-10 10:54:38
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大头妞妞

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 贱贱JMe at 2017-06-10 10:54:38
你做的绝对定量还是相对定量，分析方法不一样...

绝对啊

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8楼2017-06-10 16:11:37
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大头妞妞

新虫 (小有名气)
求大神指导荧光定量中绝对定量灵敏度的问题-4

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9楼2017-06-10 16:13:45
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矮腿妹的烦恼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 贱贱JMe at 2017-06-10 10:54:38
你做的绝对定量还是相对定量，分析方法不一样...

我做的相对定量

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10楼2017-06-10 23:10:46
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