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wuqianqian新虫 (初入文坛)
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[求助]
关于细菌同源重组基因敲除的问题请教
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我做链球菌的基因敲除，采用的是同源重组的方法，敲除质粒左臂加抗性加右臂已经构好，进行电转敲除，电转杯预冷紫外照射30min,取5ul的质粒加入到50ul的链球菌感受态中，混匀冰浴10min，然后转至预冷的电转杯中，电转参数是2250V/CM,25O,25uf,进行电转，电转结束后加入预热的培养基950ul重悬细菌，37度160rpm培养2h,将菌液涂板130ug/ml spc抗性的固体培养基上，37度48h.做了好几次电转，长菌挑单pcr全p出要替换的目的基因，管了新做的感受态又不长菌了，麻烦大神指导，小弟感激不尽！ 发自小木虫Android客户端 |
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