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木易人可

新虫 (初入文坛)

[求助] GST pull down 已有1人参与

我筛选了几个酸诱导启动子,想找一下他们的转录因子,用pull down实验可以做吗?具体的pull down 实验步骤能不能给我说一下,让我学习哈

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wusofa

金虫 (小有名气)

蛋白RNA相互作用研究

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应该是可以做的,把启动子序列标记biotin,做Pulldown;应该是可以找到目的转录因子
找出来后再做ChIP验证
再测定动力学参数,确定是直接结合还是间接结合
2楼2017-06-06 09:13:46
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木易人可

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wusofa at 2017-06-06 09:13:46
应该是可以做的,把启动子序列标记biotin,做Pulldown;应该是可以找到目的转录因子
找出来后再做ChIP验证
再测定动力学参数,确定是直接结合还是间接结合

谢谢,我看到文献中有用生物素标记,然后找到转录因子再做分析,我有个疑惑,GST pull down 蛋白与蛋白间相互作用,那如何用启动子序列找到转录因子?

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3楼2017-06-06 22:47:15
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wusofa

金虫 (小有名气)

蛋白RNA相互作用研究

引用回帖:
3楼: Originally posted by 木易人可 at 2017-06-06 22:47:15
谢谢,我看到文献中有用生物素标记,然后找到转录因子再做分析,我有个疑惑,GST pull down 蛋白与蛋白间相互作用,那如何用启动子序列找到转录因子?
...

感觉我们相互之间没理解。
我说的就是用启动子序列找转录因子。启动子序列标记biotin,做pulldown就是把启动子结合的蛋白拉下来。这些蛋白可能是直接结合的转录因子,也可能是间接结合的调节蛋白。
不理解你的GST蛋白要用到哪,或者你的意思是不是用GST蛋白过表达来做?

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4楼2017-06-07 06:32:18
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木易人可

新虫 (初入文坛)

谢谢啦,我明白你的意思了,现在在查资料,准备购买试剂盒

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5楼2017-06-07 09:28:41
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