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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » GST pull down
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木易人可

新虫 (初入文坛)

[求助] GST pull down 已有1人参与

我筛选了几个酸诱导启动子，想找一下他们的转录因子，用pull down实验可以做吗？具体的pull down 实验步骤能不能给我说一下，让我学习哈

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1楼 2017-06-05 12:22:37
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wusofa

金虫 (小有名气)

蛋白RNA相互作用研究

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是可以做的，把启动子序列标记biotin，做Pulldown；应该是可以找到目的转录因子
找出来后再做ChIP验证
再测定动力学参数，确定是直接结合还是间接结合
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2楼2017-06-06 09:13:46
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木易人可

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wusofa at 2017-06-06 09:13:46
应该是可以做的，把启动子序列标记biotin，做Pulldown；应该是可以找到目的转录因子
找出来后再做ChIP验证
再测定动力学参数，确定是直接结合还是间接结合

谢谢，我看到文献中有用生物素标记，然后找到转录因子再做分析，我有个疑惑，GST pull down 蛋白与蛋白间相互作用，那如何用启动子序列找到转录因子？

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3楼2017-06-06 22:47:15
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wusofa

金虫 (小有名气)

蛋白RNA相互作用研究
引用回帖:
3楼: Originally posted by 木易人可 at 2017-06-06 22:47:15
谢谢，我看到文献中有用生物素标记，然后找到转录因子再做分析，我有个疑惑，GST pull down 蛋白与蛋白间相互作用，那如何用启动子序列找到转录因子？
...

感觉我们相互之间没理解。
我说的就是用启动子序列找转录因子。启动子序列标记biotin，做pulldown就是把启动子结合的蛋白拉下来。这些蛋白可能是直接结合的转录因子，也可能是间接结合的调节蛋白。
不理解你的GST蛋白要用到哪，或者你的意思是不是用GST蛋白过表达来做？

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4楼2017-06-07 06:32:18
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木易人可

新虫 (初入文坛)
谢谢啦，我明白你的意思了，现在在查资料，准备购买试剂盒

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5楼2017-06-07 09:28:41
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