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求助关于藻类MDA丙二醛的测定问题已有2人参与
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如题，本人用农药对淡水微藻进行急性毒性暴露试验，测定了抗氧化酶系统及丙二醛，结果显示处理组的MDA与对照组相比无显著差异，ps：处理组的生长状况较差， 文献上的结果基本都显示随着处理浓度的升高，MDA的值也会升高，求助各位大神，不知道是什么原因呢？所用方法为： （1）酶液的提取： ① 收集40ml藻液，4℃ 7000r离心10min； ② 将藻细胞转移至研钵中，0-4℃（加液氮）条件下研磨至匀浆。加4℃PBS缓冲液定容至4m； (PBS缓冲液配置：甲液-0.05mol/L Na2HPO4溶液：磷酸氢二钠 7.099g,定容至1000ml,于棕色瓶中储存；乙液-0.05mol/L KH2PO4:称取磷酸二氢钾6.803g,定容至1000ml.取用pH为 7.8，其中甲液90ml,乙液10ml) ③ 4℃，7000r，15min 离心，上清为粗酶液。 （2）丙二醛（MAD）测定 硫代巴比妥酸法测定 试剂:50 mol/L、PH7.8的PBS 20%三氯乙酸（TCA）：10g溶于50ml的蒸馏水中，根据用量来确定所需 0.5%硫代巴比妥酸（TBA）溶液：0.5gTBA溶解于100ml 20%TCA中 步骤： (1)总体系共4ml，首先向10ml的比色管中加入0.5ml的PBS，接着加入2.5ml0.5%的TBA溶液，最后加入1ml的酶液。 (2)沸水浴100℃、20min (3)分别测定450nm、532nm及600nm的光吸收值 2、计算方式：MDA（mmol/L）=6.45*(OD532-OD600)-0.56*OD450 |
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wzwei
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