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Erlineee

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr条带错乱 已有2人参与

p了超级多次,RNA都提了两次了,但是一直p出很多条带……求问是为什么……
下图为刚p的第1孔,第2孔和最后一孔是我的基因。条带很错乱,而且最亮的地方长度也不对。
求你们了大神!!!

pcr条带错乱


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bbass533

禁虫 (小有名气)


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-02 22:44:23
本帖内容被屏蔽

2楼2017-06-01 15:12:33
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Erlineee

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bbass533 at 2017-06-01 15:12:33
PCR有杂带,一般是引物的特异性不好。建议重新设计引物在P试试

怎么看引物的特异性呢

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3楼2017-06-01 16:16:10
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bbass533

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

4楼2017-06-02 11:48:18
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我真不二

新虫 (初入文坛)

你酶有最后加么加完后要混匀

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5楼2017-06-02 21:33:45
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Ivy尘

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-06-02 22:44:41
非目的条带多。可以采取的措施有:
1. 提高退火温度(如果引物的TM值够高),减少非特异性扩增
2.采用Touch-down PCR,富集目的片段、减少非特异性片段扩增
3.重新设计引物,每次设计好,使用Oligo 7的 Analyze-FALSE priming site-Forward primmer/Reverse Primer分析一下引物的错配效率,避免设计错配的引物。
6楼2017-06-02 21:57:54
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