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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr条带错乱
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Erlineee

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr条带错乱 已有2人参与

p了超级多次，RNA都提了两次了，但是一直p出很多条带……求问是为什么……
下图为刚p的第1孔，第2孔和最后一孔是我的基因。条带很错乱，而且最亮的地方长度也不对。
求你们了大神！！！

pcr条带错乱


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1楼 2017-06-01 15:07:47
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bbass533

禁虫 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-02 22:44:23
本帖内容被屏蔽
2楼2017-06-01 15:12:33
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Erlineee

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bbass533 at 2017-06-01 15:12:33
PCR有杂带，一般是引物的特异性不好。建议重新设计引物在P试试

怎么看引物的特异性呢

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3楼2017-06-01 16:16:10
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bbass533

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2017-06-02 11:48:18
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我真不二

新虫 (初入文坛)
你酶有最后加么加完后要混匀

发自小木虫Android客户端
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5楼2017-06-02 21:33:45
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Ivy尘

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-06-02 22:44:41
非目的条带多。可以采取的措施有：
1. 提高退火温度（如果引物的TM值够高），减少非特异性扩增
2.采用Touch-down PCR，富集目的片段、减少非特异性片段扩增
3.重新设计引物，每次设计好，使用Oligo 7的 Analyze-FALSE priming site-Forward primmer/Reverse Primer分析一下引物的错配效率，避免设计错配的引物。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2017-06-02 21:57:54
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