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Nathalie

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 5
帖子: 1
在线: 2.9小时
虫号: 5186336
注册: 2016-10-31
专业: 水产养殖学

[求助] 求助：RT-PCR后actin 扩不出来？已有1人参与

求助：RNA提取后，跑电泳是有三条带的，但是反转后跑PCR扩不出来actin ,请问是什么原因？求指教！！

pcr条件和以前一样，以前用同样的条件是可以扩出来的
ps：只扩出来一个组织的，其他组织的RNA反转后，跑电泳没有actin目的条带

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1楼 2017-05-31 21:18:04

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

kanqi123

新虫 (小有名气)

应助: 6 (幼儿园)
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在线: 49.7小时
虫号: 1786396
注册: 2012-04-29
性别: GG
专业: 临床分子生物学检验

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

首先看电泳有没问题，如果marker没问题，说明电泳没问题。然后就是检查PCR，影响PCR的有引物，模板，酶，退火温度等，既然条件跟以前一样，说明引物和退火温度没问题，那么有问题的可能是酶或者模板，酶的问题只需要看看它进行其他的PCR的时候有没有问题就知道了，然后就是模板了，你的模板是RNA反转的cDNA，RNA没有问题，那么很有可能是反转出了问题。