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双酶切连接不成功 已有7人参与
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双酶切连接这么难吗，怎么就连不上！目的片段3300，载体3000，酶是NEB的。,双酶切后10ulT4连接体系，体积比设了好几个，转化子长了好多，挑菌，菌液PCR都是假阳性，欲哭无泪( ˙-˙ )，该怎么办？   发自小木虫Android客户端 |
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你换TAKARA的T4酶或者solution one的连接酶。片段和载体比例差不多1:1，4度过夜。保证连上。。。载体构建我做得非常多。5千多的片段连10000的载体我也一次做出来。NEB的酶全球最好，也很贵，用的唯一方便就是它连接时间短。但是，稍微时间过长或者操作不当，假阳性非常严重。 发自小木虫Android客户端 |
42楼2017-06-03 22:11:52
2楼2017-05-30 22:01:09
3楼2017-05-30 22:13:28
kangaroo0513
新虫 (正式写手)
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4楼2017-05-30 22:32:27