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双酶切连接不成功 已有7人参与
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双酶切连接这么难吗，怎么就连不上！目的片段3300，载体3000，酶是NEB的。,双酶切后10ulT4连接体系，体积比设了好几个，转化子长了好多，挑菌，菌液PCR都是假阳性，欲哭无泪( ˙-˙ )，该怎么办？   发自小木虫Android客户端 |
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wangxiaoguo
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第二，酶切和连接时间最好长一些。一般双酶切出现假阳性的话，很可能是酶切不是很完全。如果两个酶位点太近的话会有位置效应的。另外，确认一下你检测的引物是唯一的。要不可能会出现扩增的并不是目的片段长度，但实际上确连好了 发自小木虫Android客户端 |
我好暴躁啊
15楼2017-05-31 22:15:16
2楼2017-05-30 22:01:09
3楼2017-05-30 22:13:28
kangaroo0513
新虫 (正式写手)
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4楼2017-05-30 22:32:27