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smile1991_26

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[求助] 点突变PCR整个质粒无目的条带已有3人参与

点突变PCR一整个质粒，买的质粒冻干粉，质粒大小8K，按照说明书溶解后，换了各种退火温度，用了两种酶，一种酶PCR后均出现抹带，另一种酶出现特别明显的引物二聚体，P了一个星期了，挺急的，引物设计完全没错

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1楼 2017-05-28 20:59:18

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smile1991_26

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

3楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2017-05-28 22:23:12
超过5k的一般都不太容易P的成功，少数酶可能能搞定。但是我做点突变都是局部突变之后连回去的，这样测序局部就可以了。否则别的地方有错你都不知道。如果你还做不出，就考虑外包给我做算了。

怎么局部突变呢……

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