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燕子sy

银虫 (小有名气)

[求助] 求助,SiHa宫颈癌细胞的总蛋白提取 已有1人参与

本人最近在提SiHa的总蛋白,9cm的皿,细胞长到90%,加300-500微的碧云天的ripa(强),冰浴30min,每隔5分钟振摇1次,12000rpm离心10min,吸取上清,问题来了,底部总是有很多拉丝的透明粘液,沉淀不下去,一吸就上来,蛋白得率也总是非常低,都不到1mg/mL。
求助,这是什么原因呢,裂解液加多加少都试过,裂解时间也延长至1h,就是不行,严重影响后面的实验进度,求大神赐教。
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我比小强还小强,越挫越勇!
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西大王研

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你试过用细胞刮刀收集一下么,

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扶朕起来,朕还能学
2楼2017-05-27 13:49:57
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燕子sy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西大王研 at 2017-05-27 13:49:57
你试过用细胞刮刀收集一下么,

先刮刀收集细胞,离心,除上清,再加ripa,我们也试过几次,也是不行。
我比小强还小强,越挫越勇!
3楼2017-05-27 16:14:05
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爱点缀在冬初

新虫 (小有名气)

加完裂解液,后,半小时再用细胞刮试试,是不是细胞碎片

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4楼2017-06-08 13:30:41
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端粒酶~

新虫 (初入文坛)

整套操作流程是不是符合规范,,细胞本来就是很脆弱的,。在提取过程中蛋白降解也是有可能的

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5楼2017-06-11 00:06:49
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dadiame

新虫 (初入文坛)

拉丝那个可能是DNA,一般超声处理去掉 。

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6楼2017-06-18 16:13:17
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燕子sy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dadiame at 2017-06-18 16:13:17
拉丝那个可能是DNA,一般超声处理去掉 。

可以多大频率,超多久啊?超声担心会把蛋白超断。。。
我比小强还小强,越挫越勇!
7楼2017-06-30 14:12:21
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燕子sy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 爱点缀在冬初 at 2017-06-08 13:30:41
加完裂解液,后,半小时再用细胞刮试试,是不是细胞碎片

谢谢,可以试试
我比小强还小强,越挫越勇!
8楼2017-06-30 15:40:31
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15113546664

新虫 (初入文坛)

9楼2017-06-30 15:48:27
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王大可可可可

新虫 (小有名气)

粘稠的是DNA,超声处理就好了,不超过一分钟就好,一定要在冰上操作。、.超声后离心就没有粘稠物了

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10楼2017-07-01 00:54:54
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