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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 求助，SiHa宫颈癌细胞的总蛋白提取
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燕子sy

银虫 (小有名气)

[求助] 求助，SiHa宫颈癌细胞的总蛋白提取 已有1人参与

本人最近在提SiHa的总蛋白，9cm的皿，细胞长到90%，加300-500微的碧云天的ripa（强），冰浴30min，每隔5分钟振摇1次，12000rpm离心10min，吸取上清，问题来了，底部总是有很多拉丝的透明粘液，沉淀不下去，一吸就上来，蛋白得率也总是非常低，都不到1mg/mL。
求助，这是什么原因呢，裂解液加多加少都试过，裂解时间也延长至1h，就是不行，严重影响后面的实验进度，求大神赐教。
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我比小强还小强，越挫越勇！
1楼 2017-05-27 13:20:38
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西大王研

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你试过用细胞刮刀收集一下么，

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扶朕起来，朕还能学
2楼2017-05-27 13:49:57
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燕子sy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西大王研 at 2017-05-27 13:49:57
你试过用细胞刮刀收集一下么，

先刮刀收集细胞，离心，除上清，再加ripa，我们也试过几次，也是不行。
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我比小强还小强，越挫越勇！
3楼2017-05-27 16:14:05
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爱点缀在冬初

新虫 (小有名气)
加完裂解液，后，半小时再用细胞刮试试，是不是细胞碎片

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4楼2017-06-08 13:30:41
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端粒酶~

新虫 (初入文坛)
整套操作流程是不是符合规范，，细胞本来就是很脆弱的，。在提取过程中蛋白降解也是有可能的

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5楼2017-06-11 00:06:49
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dadiame

新虫 (初入文坛)
拉丝那个可能是DNA，一般超声处理去掉 。

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6楼2017-06-18 16:13:17
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燕子sy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dadiame at 2017-06-18 16:13:17
拉丝那个可能是DNA，一般超声处理去掉 。

可以多大频率，超多久啊？超声担心会把蛋白超断。。。
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我比小强还小强，越挫越勇！
7楼2017-06-30 14:12:21
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燕子sy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 爱点缀在冬初 at 2017-06-08 13:30:41
加完裂解液，后，半小时再用细胞刮试试，是不是细胞碎片

谢谢，可以试试
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我比小强还小强，越挫越勇！
8楼2017-06-30 15:40:31
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15113546664

新虫 (初入文坛)
蛋白酶抑制剂

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9楼2017-06-30 15:48:27
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王大可可可可

新虫 (小有名气)
粘稠的是DNA，超声处理就好了，不超过一分钟就好，一定要在冰上操作。、.超声后离心就没有粘稠物了

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10楼2017-07-01 00:54:54
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