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larameme

新虫 (初入文坛)

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虫号: 4290506
注册: 2015-12-15
专业: 环境微生物学

[求助] q-PCR 已有1人参与

请教各位大神，RNA提出来以后反转录的cDNA扩不出来目的基因片段，但是基因组DNA能扩出来，这是什么原因？

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1楼 2017-05-27 11:54:55

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

wusofa

金虫 (小有名气)

蛋白RNA相互作用研究

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红花: 4
帖子: 167
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虫号: 943933
注册: 2010-01-17
性别: GG
专业: 生物物理、生物化学与分子

引用回帖:

7楼: Originally posted by larameme at 2017-05-31 18:12:34
能详细解释一下第一种可能性吗？我的目的基因片段在100-200bp之间，第二种可能性不太大
...

你的cDNA怎么定量的？
一般cDNA是不能定量的，因为A280定量的依据是碱基对280nM的光有吸收，逆转的时候我们加的dNTP是过量的，所以cDNA是定量不了的，除非你逆转录之后再做一部纯化。cDNA的量一般用RNA当量表示。比如你逆转的时候用的1ug RNA，就认为cDNA相当于1ug。
所以Ｐ不出来，要么就是你Ｐ的RNA表达量太低，要么就是降解了，不然就可能逆转出问题了