应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » q-PCR
81/1返回列表
查看: 831  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

larameme

新虫 (初入文坛)

[求助] q-PCR 已有1人参与

请教各位大神，RNA提出来以后反转录的cDNA扩不出来目的基因片段，但是基因组DNA能扩出来，这是什么原因？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-05-27 11:54:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wusofa

金虫 (小有名气)

蛋白RNA相互作用研究

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
RNA抽提失败，RNA降解，或者表达量太低都有可能
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

larameme
2楼2017-05-27 13:35:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

larameme

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by wusofa at 2017-05-27 13:35:11
RNA抽提失败，RNA降解，或者表达量太低都有可能

会不会是引物的问题

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-05-30 21:28:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wusofa

金虫 (小有名气)

蛋白RNA相互作用研究
引用回帖:
3楼: Originally posted by larameme at 2017-05-30 21:28:57
会不会是引物的问题
...

你不是基因组DNA能P出来吗？所以引物有问题的可能性不大
赞一下 回复此楼
4楼2017-05-31 08:32:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

larameme

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wusofa at 2017-05-31 08:32:23
你不是基因组DNA能P出来吗？所以引物有问题的可能性不大...

RNA当时提出来后跑完电泳显示较大的那两条带清晰可见，最小的那条带没有，浓度在100ng/ul左右，A260/A280为2.0。反转录成cDNA的浓度在1200-1300ng/ul之间！我觉得RNA质量和cDNA都没什么问题啊！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-05-31 17:52:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hill05

新虫 (小有名气)
可能你取的样品中，基因的表达量低。或者你的目的片段过大，对cDNA的要求更高。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

larameme
6楼2017-05-31 18:01:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

larameme

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by hill05 at 2017-05-31 18:01:50
可能你取的样品中，基因的表达量低。或者你的目的片段过大，对cDNA的要求更高。

能详细解释一下第一种可能性吗？我的目的基因片段在100-200bp之间，第二种可能性不太大

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2017-05-31 18:12:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wusofa

金虫 (小有名气)

蛋白RNA相互作用研究
引用回帖:
7楼: Originally posted by larameme at 2017-05-31 18:12:34
能详细解释一下第一种可能性吗？我的目的基因片段在100-200bp之间，第二种可能性不太大
...

你的cDNA怎么定量的？
一般cDNA是不能定量的，因为A280定量的依据是碱基对280nM的光有吸收，逆转的时候我们加的dNTP是过量的，所以cDNA是定量不了的，除非你逆转录之后再做一部纯化。cDNA的量一般用RNA当量表示。比如你逆转的时候用的1ug RNA，就认为cDNA相当于1ug。
所以Ｐ不出来，要么就是你Ｐ的RNA表达量太低，要么就是降解了，不然就可能逆转出问题了
赞一下 回复此楼
8楼2017-06-01 09:41:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 larameme 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工调剂 +9 A-哆啦Z梦 2026-03-23 15/750 2026-03-25 11:18 by Ainin_
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 298求调剂 +3 Rong$$$ 2026-03-18 3/150 2026-03-25 10:13 by userper
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 0805 316求调剂 +6 大雪深藏 2026-03-18 6/300 2026-03-24 22:13 by peike
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考博] 申博26年 +4 八6八68 2026-03-19 4/200 2026-03-24 15:49 by 小Ben呵呵
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭