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新虫 (初入文坛)

[求助] qpcr中一个模板的问题 已有1人参与

昨天做了qpcr,发现一个cDNA的内参(B-action)ct值达到31,而目的基因的ct值中三个复孔只出现一个值,也是30左右。后面我重复了这个模板,结果还是一样,最后考虑是cDNA的问题,重新逆转录,用这个模板再一次做qpcr,却发现内参ct值很小,就是2点多,3点多,目的基因也是如此,溶解曲线和扩增曲线还可以!我想会不会是rna出现问题,然后跑胶,发现条带挺好的,到底是什么问题(O_O)?求解

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木子青静静

禁虫 (初入文坛)

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2楼2017-05-24 16:41:27
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13139910423

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 木子青静静 at 2017-05-24 16:41:27
检测一下cDNA浓度看看,或者做个普通PCR检测

嗯嗯!好的

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3楼2017-05-25 19:19:39
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Suxi772

铁虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-26 16:09:02
楼主做逆转录前把基因组DNA消化了没有?还有,把CT值31的和CT值2、3的QPCR产物都跑胶,看看条带到底是不是目的带啊?指不定两次扩的根本不是同一个。。
4楼2017-05-26 15:21:46
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13139910423

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Suxi772 at 2017-05-26 15:21:46
楼主做逆转录前把基因组DNA消化了没有?还有,把CT值31的和CT值2、3的QPCR产物都跑胶,看看条带到底是不是目的带啊?指不定两次扩的根本不是同一个。。

我跑了胶,看到ct值31的条带,特别暗,我觉得cdna有问题,就重新提取rna,逆转录,现在ct值就好了!

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5楼2017-05-29 10:42:25
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