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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » qpcr中一个模板的问题
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新虫 (初入文坛)

[求助] qpcr中一个模板的问题 已有1人参与

昨天做了qpcr,发现一个cDNA的内参(B-action)ct值达到31，而目的基因的ct值中三个复孔只出现一个值，也是30左右。后面我重复了这个模板，结果还是一样，最后考虑是cDNA的问题，重新逆转录，用这个模板再一次做qpcr，却发现内参ct值很小，就是2点多，3点多，目的基因也是如此，溶解曲线和扩增曲线还可以！我想会不会是rna出现问题，然后跑胶，发现条带挺好的，到底是什么问题(O_O)？求解

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1楼 2017-05-24 16:03:59
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木子青静静

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
2楼2017-05-24 16:41:27
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13139910423

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 木子青静静 at 2017-05-24 16:41:27
检测一下cDNA浓度看看，或者做个普通PCR检测

嗯嗯！好的

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3楼2017-05-25 19:19:39
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Suxi772

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-26 16:09:02
楼主做逆转录前把基因组DNA消化了没有？还有，把CT值31的和CT值2、3的QPCR产物都跑胶，看看条带到底是不是目的带啊？指不定两次扩的根本不是同一个。。
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4楼2017-05-26 15:21:46
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13139910423

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Suxi772 at 2017-05-26 15:21:46
楼主做逆转录前把基因组DNA消化了没有？还有，把CT值31的和CT值2、3的QPCR产物都跑胶，看看条带到底是不是目的带啊？指不定两次扩的根本不是同一个。。

我跑了胶，看到ct值31的条带，特别暗，我觉得cdna有问题，就重新提取rna，逆转录，现在ct值就好了！

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5楼2017-05-29 10:42:25
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