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琼脂糖凝胶电泳结果分析，跪求原因
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提取出的DNA浓度测量了一下是200-300ng/ul，温度梯度PCR以后的电泳图是这样的，第一行和第二行是不同类型的基因。Marker是右边的一排。 发自小木虫IOS客户端 |
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9212930562楼2017-05-23 22:37:06
3楼2017-05-23 23:39:53
4楼2017-05-23 23:43:01
5楼2017-05-24 08:57:52
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DNA提取3周，体系是50ul，模版加15ng。我稀释成1.5ng/ul，然后加了10ul。94度预变性3分钟，94度变性30秒，退火50到64度30秒，72度延伸1分钟 发自小木虫IOS客户端 |
6楼2017-05-24 09:07:00
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-25 07:42:34
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-25 07:42:34
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退火温度试一下55℃，你50-62℃每一个温梯是多少？2℃吗？在看一下你基因大小，延伸时间调整一下 发自小木虫Android客户端 |
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7楼2017-05-24 09:25:45
8楼2017-05-24 23:38:15
xinxiyuzhou
版主
- 应助: 78 (初中生)
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首先，你这个基因是真核还是原核的？要是原核的可以直接做pcr，如果是真核的，要提RNA，逆转录，然后再PCR。退火温度跟引物设计有关，引物退火温度上下10度都可以。一般情况下，56度，或者58度，低到52度，高到60度，这四个温度都可以，不用设计温度梯度梯度。退火温度越高，特异性越高，理论上条带越单一。酶也会影响结果。你的PCR的体系贴出来看看。延伸一般是1kb1min都没有问题。你的目的片段大小是多少？在问问题的时候这些都要讲清楚，不然根本就找不到原因。 发自小木虫Android客户端 |
9楼2017-05-25 10:12:23
